产品目录

丹酰尸胺(Dansylcadaverine，MDC)是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm。MDC染色液适用于培养细胞的自噬染色，可与EB合用双染。

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程，可靶向长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质组分并通过溶酶体途径进行降解，自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的，包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。

• 低速离心机、1.5mL离心管、载玻片、盖玻片、96孔板、荧光显微镜、流式细胞仪。
  
• 培养液、蒸馏水、磷酸缓冲盐溶液(1×PBS，无钙镁)、PBS-Triton X-100(0.1～0.3%)。

• MDC Stain和EB对人体有一定害处，请小心操作。
  
• 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 玻片法
  
  • 收集细胞，用300～500μL的PBS清洗细胞1次，800～1000rpm离心5min，弃上清。
    
  • 加入适量的PBS-Triton X-100重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/mL。
    
  • 取90μL细胞悬液至新的1.5mL离心管中，加入10μL的MDC Stain，轻轻混匀。
    
  • 37℃或室温避光染色15～45min。
    
  • 800～1000rpm离心5min，弃上清，收集细胞，用300～500μL的PBS清洗细胞2次，800～1000rpm离心5min，弃上清。
    
  • 加入100μL的PBS重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
    
  • 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。
• 96孔板法
  
  • 配制MDC染色工作液：按MDC Stain∶PBS-Triton X-100=1∶9的比例混合，即为MDC染色工作液；如不能及时用完，-20℃避光保存。
    
  • 轻轻吸除96孔板中的培养液，加入100μL MDC染色工作液至各孔，37℃ 5% CO₂避光孵育15～60min，各孔加入100μL PBS清洗2～3次。
    
  • 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。
• MDC与EB双染法
  
  • 收集细胞，用300～500μL的PBS清洗细胞1次，800～1000g离心5min，弃上清。
    
  • 加入适量的PBS-Triton X-100重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/mL。
    
  • 取90μL细胞悬液至新的1.5mL离心管中，加入10μL的MDC Stain和0.2μM EB染色液，轻轻混匀。
    
  • 滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。
    
  • 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。