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芽孢染色液(Scharffer-Fulton法)主要由孔雀绿染色液和芽孢复染色液组成，因此该法又称为孔雀绿法，芽孢会被染成绿色，营养体呈红色，试剂比较灵敏，操作简单，结果判断更可靠，但应注意观察芽孢应在成熟期，但也不能过久，否则只能看到芽孢，而营养体已经消失。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

细菌是否有芽孢以及芽孢的形状和位置都是细菌的重要特征，细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁结构复杂、致密、通透性低，着色和脱色都比营养细胞困难。芽孢有很强的抗热和抗化学物质的特性，当采用碱性染料并加热或延长染色时间时，使菌体和芽孢都能着色，再用蒸馏水冲洗脱去菌体颜色，但芽孢的颜色仍然可以保留，可以在显微镜下明显区分芽孢和营养体的形态。

• 玻片应洁净，无油污。
  
• 孔雀绿染色液有时会析出沉淀，属于正常现象，当析出过多沉淀时应过滤。
  
• 芽孢形成于生长发育期，观察芽孢应在成熟期，但也不能过久，否则只能看到芽孢，而营养体已经消失。
  
• 染色过程应小心操作，防止菌脱落。
  
• 固定时不宜用高热火焰固定。
  
• 添加孔雀绿染色液，请勿使涂片干燥。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 在洁净无油脂的载玻片上滴加1滴蒸馏水。
  
• 用接种环挑取少许巨大芽孢杆菌斜面的菌体，与蒸馏水混合，制成涂片，自然干燥。
  
• 在涂液处滴加孔雀绿染色液，使细菌分布均匀。弱火间断加热染色10min。
  
• 用水轻轻冲洗，芽孢复染液染色1min，用水冲洗。
  
• 镜检：干燥后镜检，观察芽孢的形状、大小，在菌体中的位置以及是否使菌体胀大。