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草酸铵结晶紫染色液(0.4%)是革兰氏染色法中的一种成分，主要由草酸铵、0.4%结晶紫、乙醇等组成，常用于革兰氏细菌的鉴别染色。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

革兰阳性菌染色中细胞经草酸铵结晶紫染色后再经Gram碘液处理，形成不溶性复合物，该复合物不能通过细胞壁，不易被乙醇脱色，所以保持紫色，染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，也可以通过选择用沙黄或石碳酸复红复染，可以区分革兰氏阳性菌和阴性菌。

• 接种环或挑取细菌的其他工具、酒精灯、载玻片、光学显微镜
  
• Gram碘液、95%乙醇、沙黄或石碳酸复红复染液

• 涂片之前，应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。
  
• 取细菌时，应注意自我防护，拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
  
• 加热固定涂片时，应注意玻片勿太靠近火焰，一般要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜。
  
• 革兰氏染色的关键在于严格掌握脱色程度，脱色时间应根据经验判断；脱色过度，阳性菌可被误染为阴性菌；脱色不够，阴性菌可被误染为阳性菌。
  
• 待检细菌培养时间会影响染色，阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解，常呈阴性。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 按实验具体要求操作或参考下列革兰氏染色的方法。
  
• 涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或者或在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与的水混合均匀，涂成一薄层。
  
• 干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥。
  
• 固定：手持载玻片一端，标本面朝上，在酒精灯的火焰外侧快速来回移动3～5次，每次1s，温度不宜过高，防止菌体蛋白变性，放置待凉后染色，也可以用甲醇或乙醇固定。
  
• 初染：滴加结晶紫染色液染色1～2min，清水冲洗去染色液。
  
• 媒染：滴加Gram碘液，并覆盖载玻片，室温放置1～2min，水洗。
  
• 脱色：滴加脱色液，摇动10～30s，直至流下的脱色液不出现紫色时为止，立即用水冲去脱色液，终止反应。
  
• 复染：滴加沙黄染色液染色30~60s，水洗。
  
• 干燥，镜检：置油镜观察。