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Cole苏木素染色液是一种化学氧化成熟的明矾苏木素，主要由苏木精、硫酸铝钾、甘油等组成，该染色液中苏木精含量量小，无氧化膜形成，对细胞核染色很清晰，不着染胞质和纤维成分，属进行性染色，故染色后可以不用盐酸乙醇分化，染色时间约5～10min，主要用于复染细胞核。

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色，细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

• 细胞核染色原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色，细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
  
• 细胞浆染色原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色，细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关，当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
  
• 分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用0.5～1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色，大多数组织经苏木素染色后，必须用盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
  
• 返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用，另外用自来水(尤其是温水)浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

• 盐酸乙醇分化液、系列乙醇、伊红染色液、4%多聚甲醛
  
• 蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等
  
• 显微镜

• 切片脱蜡应尽量干净，系列乙醇应经常更换新液。
  
• 盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。
  
• 乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭保存。
  
• 冷冻切片染色时间尽量要短。
  
• 蓝化液常使用0.2～1%氨水或Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂溶液。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 石蜡切片染色
  
  • 切片脱蜡至水
    ① 二甲苯或浸蜡脱蜡透明液(GL2755)作用2次，每次5～10min。
    ② (可选)无水乙醇作用2次，每次3～5min。
    ③ 95%的乙醇，3～5min
    ④ 90%的乙醇，3～5min
    ⑤ 80%的乙醇，3～5min
    ⑥ 自来水或蒸馏水冲洗，1～3min
    
  • 染色
    ① Cole苏木素染色液，5～10min
    ② 自来水或蒸馏水冲洗，5～10s
    ③ (可选)盐酸乙醇分化，2～5s
    ④ 自来水冲洗，20～30s
    ⑤ (可选)蓝化液返蓝，20～40s
    ⑥ 自来水冲洗，30～60s
    ⑦ 伊红染色液(水溶)染色，3～5min
    ⑧ 自来水冲洗，1～5s
    
  • 脱水、透明、封固
    ① 80%乙醇，10～20s
    ② 90%乙醇，10～20s
    ③ 95%乙醇作用2次，每次1～2min。
    ④ 无水乙醇作用2次，每次2～3min。
    ⑤ 二甲苯或浸蜡脱蜡透明液(GL2755)透明3次，每次2～3min。
    ⑥ 中性树脂封片。
• 冰冻切片染色
  
  • 乙醚-乙醇混合固定液，5～10s
    
  • 自来水冲洗，2～5s
    
  • Cole苏木素染色液滴染，1～2min(可加热至50℃)。
    
  • 自来水冲洗，2～5s
    
  • (可选)盐酸乙醇分化，2～5s
    
  • 自来水冲洗，2～5s
    
  • (可选)蓝化液返蓝，2～5s
    
  • 自来水冲洗，5～10s
    
  • 伊红染色液染色，2～5s
    
  • 自来水冲洗，1～2s
    
  • 80%的乙醇，1～2s
    
  • 95%的乙醇，1～2s
    
  • 无水乙醇，2～5s
    
  • 苯酚二甲苯(1:3)，2～5s
    
  • 二甲苯或浸蜡脱蜡透明液(GL2755)透明3次，每次2～5s。
    
  • 中性树脂封片
• 细胞染色
  
  • 4%多聚甲醛固定10～20min。
    
  • 自来水冲洗2次，每次2min。
    
  • 蒸馏水冲洗2次，每次2min。
    
  • 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。