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酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)以β-甘油磷酸钠为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸盐，遇铅离子则生成磷酸铅沉淀，再被S²⁺置换，最终生成硫化铅棕黑色沉淀，酸性磷酸酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu²⁺、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn²⁺为该酶的激活剂，冰冻切片和石蜡切片均可，但多用冰冻切片。

酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。

• 蒸馏水、二甲苯或环保脱蜡透明液、甘油明胶
  
• 温箱或水浴锅、染色缸

• ACP孵育液、ACP硫化液易失效，最好分成小份储存。ACP硫化液具有腐蚀性。
  
• 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
  
• 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
  
• 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
  
• 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
  
• 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 冰冻切片染色
  
  • 冰冻切片至蒸馏水。
    
  • 切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染15～60min。
    
  • 入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。
    
  • 切片入硫化工作液，孵育1～2min。
    
  • 流水冲洗3～5min，蒸馏水洗。
    
  • (可选)核固红复染细胞核，蒸馏水洗，甘油明胶封片。
• 石蜡切片染色
  
  • 石蜡切片二甲苯或脱蜡透明液脱蜡至蒸馏水。
    
  • 切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染4～12h，可以延长至24h。
    
  • 入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。
    
  • 切片入硫化工作液，孵育1～2min。
    
  • 流水冲洗3～5min，蒸馏水洗。
    
  • 可选：核固红复染细胞核，蒸馏水洗。
    
  • 石蜡切片脱水，常规二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封片。