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本试剂盒采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，此法以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经酶水解释放出磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴，最终产物为黑色硫化钴沉淀。

• 蒸馏水、二甲苯或环保脱蜡透明液、甘油明胶
  
• 恒温箱或水浴锅、染色缸

• ALP孵育液、ALP硫化液易失效，最好分成小份储存，一经开启立即使用。
  
• ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。
  
• 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
  
• 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
  
• 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
  
• 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
  
• 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 石蜡切片染色
  
  • 石蜡切片二甲苯或脱蜡透明液脱蜡至蒸馏水。
    
  • 切片入ALP孵育液中37℃孵育2~12h，流水洗2min，入蒸馏水。
    
  • 入硝酸钴溶液中37℃孵育5min，流水洗5min后，入蒸馏水。
    
  • 切片入硫化工作液，孵育2min。
    
  • 流水洗10min，入蒸馏水。
    
  • 可选：核固红复染细胞核，蒸馏水洗。
    
  • 石蜡切片常规脱水，二甲苯或脱蜡透明液透明，树胶封片。
• 冰冻切片染色
  
  • 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定2～5min。
    
  • 切片入ALP孵育液中37℃孵育5～15min，流水洗2min，入蒸馏水。
    
  • 入硝酸钴溶液，37℃孵育5min，流水洗5min后，入蒸馏水。
    
  • 切片入ALP硫化工作液，孵育1～2min。
    
  • 流水洗10min，入蒸馏水。
    
  • 可选：核固红复染细胞核，蒸馏水洗，甘油明胶封片。

• ALP对照液为不含底物的孵育液，取相同的切片入ALP对照液，其余同上，结果为阴性。
  
• 备选方案：切片进入ALP孵育液前，可先经碘液和5%硫代硫酸钠溶液各3min，充分水洗后再进行孵育等步骤，可用此法作阴性对照。