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结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维，而胶原纤维(collagen fiber)是分布最广、含量最多的一种纤维。Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维，该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，然而淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色(淡绿)或蓝色(苯胺蓝)，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

改良Masson三色染色与常规Masson三色染色的区别在于采用天青石蓝苏木素淡染细胞核，其特点在于分化时间短(1～2min)；色彩清晰鲜艳；适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；所染切片保存时间长且不易褪色；胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

• 切片脱蜡应尽量干净。酸性乙醇的分化时间应根据切片薄厚，组织的类别和新旧而定。
  
• 磷钼酸的作用一方面是使染上红色的胶原纤维被分化成无色或淡红色，而肌纤维纤维素等仍呈鲜红色；另一方面对胶原纤维又起媒染作用，使胶原纤维与苯胺蓝液较易结合。
  
• 苯胺蓝液染色后用弱酸溶液处理，目的是除去原浆内的蓝色，使染色鲜艳和清晰。如Zenker液固定的组织，弱酸溶液处理可延长至5min。
  
• 弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配制0.1～0.3%乙酸溶液予以替代。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 组织固定于10%福尔马林固定液，常规脱水包埋，切片厚4μm，常规脱蜡至水。
  
• 切片入Bouin液，室温作用一晚或置入37℃温箱内2h进行媒染，然后流水冲洗至切片上的黄色消失。
  
• 天青石蓝染色液滴染2～3min，稍水洗。
  
• Mayer苏木素染色液滴染2～3min，稍水洗。
  
• 酸性乙醇分化液分化数秒，流水冲洗10min。
  
• 丽春红品红染色液滴染10min，蒸馏水稍冲洗。
  
• 磷钼酸溶液处理约10min。
  
• 倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染5min。
  
• 弱酸溶液处理2min。
  
• 95%的乙醇快速脱水。无水乙醇脱水3次，每次5~10s。
  
• 二甲苯或脱蜡透明液透明3次，每次1～2min，中性树胶封固。