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嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合，番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布；当软骨受到损伤时软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色，通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析，番红O分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨，软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨，软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。

• 10%福尔马林固定液、脱钙液、蒸馏水、系列乙醇
  
• 二甲苯或环保脱蜡透明液、中性树胶

• 切片在Safranin O Stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。
  
• 切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。
  
• Safranin O Stain染色后不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。
  
• 95%乙醇脱水时间不宜过长。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。
  
• 常规二甲苯或脱蜡透明液脱蜡至水，蒸馏水洗1min。
  
• 入Safranin O Stain浸染2～5min，蒸馏水洗1min。
  
• 用Safranin分化液洗涤切片1～2min，蒸馏水洗1min。
  
• 分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。
  
• 二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封固。
  
• 染色结果：软骨基质被染成红色。