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本试剂盒是一种采用经典的Hoechst33258进行细胞凋亡检测的快速简便的试剂盒，当细胞发生凋亡时染色质会固缩，Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。

本试剂盒经常用于培养的贴壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测，该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×10⁶之间。

• 可观察蓝光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜、载玻片、盖玻片
  
• PBS或生理盐水、预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

• 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测，使用抗荧封片剂时也应避光操作。
  
• 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高离心力或延长离心时间。
  
• Hoechst染色液对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 贴壁细胞
  
  • 取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5min或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次，将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%～80%。
    
  • 加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst固定液0.5mL，固定10min或更长时间(可4℃过夜)。
    
  • 去除固定液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体，洗涤时宜用摇床或手动晃动。
    
  • 加入Hoechst染色液0.5mL，孵育5min(也可用摇床或手动晃动数次)。
    
  • 弃染色液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体，洗涤时宜用摇床或手动晃动。
    
  • 滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片剂，尽量避免气泡。
    
  • 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核，激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。
• 悬浮细胞
  
  • 离心收集细胞样品于1.5mL离心管内并弃液，加入Hoechst固定液0.5mL，缓缓悬起细胞，固定10min或更长时间(亦可4℃过夜)。
    
  • 低速离心去除固定液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，洗涤时手动晃动数次。
    
  • 低速离心离心后吸去大部分液体保留约50μL液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
    
  • 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
    
  • 滴加Hoechst染色液0.5mL，孵育5min，用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
    
  • 弃染色液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体，洗涤时宜用摇床或手动晃动。
    
  • 滴1滴抗荧光封片剂于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
    
  • 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核，激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。
• 组织切片
  
  • 常规包埋切片。
    
  • 用PBS或生理盐水洗2次，每次3min。洗涤时手动晃动数次。
    
  • 均匀滴上Hoechst染色液0.5mL，孵育5分钟。
    
  • 弃染色液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体，洗涤时宜用摇床或手动晃动。
    
  • 将切片置于载玻片上，滴一滴抗荧光封片剂，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
    
  • 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核，激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。