3D细胞核染色液是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的细胞核染色的DAPI溶液。仅需染色10分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的细胞核蓝色荧光染色。如果细胞球或类器官中有凋亡细胞，其细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。本制品不仅可以用于常规的细胞核染色，也能用于监测细胞凋亡等细胞核异常现象。
3D细胞核染色液适用范围广。本制品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官，包括超低吸附细胞培养板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。不仅可以用于常规的细胞核荧光染色，也能用于检测细胞凋亡。
3D细胞核染色液使用便捷，整个实验过程仅需约10～30分钟即可完成。对于常规的3D细胞活细胞染色，仅需加入本制品避光孵育10分钟即可进行荧光检测，也可以固定后再加入本制品进行染色。本制品固定后染色效果优于活细胞直接染色效果。
本制品和适用于2D细胞的DAPI染色液对3D培养的HCT-116和HeLa细胞的染色效果对比参考图1。
图1.本制品和DAPI染色液对于3D培养的HCT-116和HeLa细胞的染色效果对比图。5000个HCT-116细胞和1000个HeLa细胞在使用3D细胞培养包被试剂盒包被的U形底96孔板中培养48小时，固定组每孔先加入100μL免疫染色固定液固定3D细胞球10分钟，然后固定组(Fixed)和活细胞组(Live)再分别用DAPI染色液（即2D DAPI）和3D细胞核染色液染色10分钟。结果显示，3D细胞核染色液对于3D细胞的染色效果显著优于适用于2D细胞的DAPI，且固定后的染色效果更明显。实际检测效果会因细胞株、实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
传统的细胞培养大多以二维(2D)的形式展开，但2D培养的细胞在生长方式、生长形态、分化和功能等方面都与体内生理条件下细胞的真实形态和结构存在明显差异，可能会因为细胞结构和组织形态的缺失，使实验结果的可信度降低。三维(3D)细胞培养能够更好地模拟体内细胞生存的微环境，更能代表体内组织，也能更真实的反应细胞与细胞间、细胞与基质间的相互作用，细胞对外源性和内源性刺激的应答也更接近于它们在体内的反应，3D细胞培养从而成为更有价值并更为可信的体外实验模型，能够获得与体内实验更加一致的实验结果。
3D肿瘤细胞模型越来越多地被用于了解疾病机制和药物研发。2D培养的肿瘤细胞，其单侧细胞膜可以均匀地获得营养和氧气，而3D培养的肿瘤细胞团的内部细胞获得营养和氧气的机会更少，形成自然的营养和氧气梯度，能更好地模拟体内微环境条件，因此3D培养的肿瘤球状体(Spheroid)或肿瘤类器官(Organoid)等能更好地模拟体内肿瘤，更利于小分子药物筛选或者肿瘤相关分子机制的研究，也更能准确地预测药物治疗的体内反应、疗效或毒性。同时，2D肿瘤细胞模型体外扩增有一定局限性，在传代后容易丧失原肿瘤的遗传异质性，出现优势克隆选择性，从而降低临床相关性。相比于2D细胞模型，3D细胞球或者类器官很多情况下能提供更可信的研究结果，简化并加速药物评价流程。自2009年小肠类器官首次建立至今，3D细胞和类器官研究已经扩展到很多组织系统，并成为生命科学最热门的领域之一。
DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
| 组分 | 10mL | 50mL | 200mL |
| 3D细胞核染色液 | 10mL | 50mL | 200mL |
| 说明书 | 1份 | ||
保存：-20℃，避光，有效期1年。
按照96孔板每孔100μL 3D细胞核染色液，本制品每10mL包装可以进行100个样品的检测。
本步骤以96孔板，每孔接种100μL细胞为例，如使用384孔板，各试剂使用量请按照相应比例进行换算。
- 3D细胞的准备：
在96孔3D培养板中每孔接种100μL细胞，细胞的接种量根据具体的实验方案，例如培养天数、需要的3D细胞球状体的大小等确定，按照3D细胞培养方案培养细胞。如有需要，可加入药物处理细胞。96孔3D培养板推荐使用3D细胞培养板包被液、3D细胞培养包被试剂盒包被的U形底96孔板，或直接使用超低吸附96孔板、超低吸附黑色透明底96孔板等。 - 3D细胞固定(选做)：
小心去除孔内培养液，每孔加入100μL免疫染色固定液，室温固定细胞10分钟。- 为达到最佳的使用效果，具体的固定时间可以根据细胞种类、培养天数、细胞球状体大小等进行调整。
- 固定细胞球等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。
- 3D细胞DAPI染色：
- 如果进行了细胞固定，小心去除免疫染色固定液；对于活细胞染色，小心去除原有细胞培养液。
- 每孔加入100μL 3D细胞核染色液，在适宜于细胞培养的温度避光孵育10分钟，对于固定的细胞可以室温避光孵育10分钟。
- 为达到最佳的染色效果，具体染色时间可以根据细胞种类、培养天数、细胞球状大小等进行调整。
- 如果进行了细胞固定，小心去除免疫染色固定液；对于活细胞染色，小心去除原有细胞培养液。
- 荧光拍摄：
染色结束后，可以无须洗涤，即可在荧光显微镜下观察。如果对于染色效果的要求不是特别高，染色5分钟，即可在荧光显微镜下观察。染色结束后，加入适量的PBS小心洗涤细胞1～2次，染色效果更佳。- PBS洗涤及换液等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。
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