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Mito-Tracker Deep Red 633是一种新型的可以检测线粒体膜电位的深红荧光探针，能够特异性地染色活细胞中的线粒体。只需简单地与细胞孵育，即可通过被动运输穿过细胞膜并聚集在有生物活性的线粒体中，从而可以产生明亮的深红荧光。

Mito-Tracker Deep Red 633可以用作线粒体特异性的荧光探针，最大激发波长为622nm，最大发射波长为648nm。和Rhodamine 123或JC-1相似，Mito-Tracker Deep Red 633对于线粒体的染色依赖于线粒体膜电位，因此该探针只能对活的细胞或组织进行染色，不能对固定或通透后的细胞或组织进行染色。

由于Mito-Tracker Deep Red 633在线粒体内的积累依赖于线粒体的膜电位，因此可以作为线粒体膜电位的指示探针，并可以通过检测线粒体膜电位的变化来检测细胞凋亡。

• Mito-Tracker Deep Red 633仅可用于活细胞的线粒体荧光标记，不能用于固定后细胞或组织，染色后也不能进行固定、通透等操作。
  
• 对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。
  
• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

• Mito-Tracker Deep Red 633储存液的配制：
  将一管50μg Mito-Tracker Deep Red 633粉末平衡至室温后，加入426μL的无水DMSO，充分溶解后，得到浓度为0.2mM的Mito-Tracker Deep Red 633储存液。适当分装后避光保存于-20℃或更低温度。
  
• Mito-Tracker Deep Red 633染色液的配制：
  
  • 取一定量0.2mM Mito-Tracker Deep Red 633储存液按照1:4000～1:1000的比例加入到细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中，使最终浓度为50nM～200nM。例如取1μL 0.2mM的Mito-Tracker Deep Red 633加入到4mL或1mL细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中，混匀后即为Mito-Tracker Deep Red 633染色液，终浓度分别为50nM或200nM。
    
  • Mito-Tracker Deep Red 633染色液使用前需37℃预温育。
    
    • 染色液中Mito-Tracker Deep Red 633的浓度可以根据实际情况进行适当调整。为降低非特异性荧光染色，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的Mito-Tracker Deep Red 633。
• 贴壁细胞的线粒体染色：
  
  • 当细胞在培养板或培养皿中培养至一定密度时，去除细胞培养液，加入步骤2中配制好的Mito-Tracker Deep Red 633染色液，37℃孵育15～30分钟。
    
    • 最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的优化。
  • 去除Mito-Tracker Deep Red 633染色液，加入37℃预温育的新鲜细胞培养液。
    
  • 用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜或荧光酶标仪进行观察或检测。此时可观察到线粒体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Mito-Tracker Deep Red 633染色液浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。
    
    • Mito-Tracker Deep Red 633染色后易淬灭，请注意尽快进行拍照等荧光检测。也可以通过降低荧光显微镜等的激发光强度(即汞灯或LED光源)或适当降低Mito-Tracker Deep Red 633染色液浓度以延缓淬灭。
• 悬浮细胞的线粒体染色：
  
  • 1000×g离心5分钟，弃上清，用37℃预热的Mito-Tracker Deep Red 633染色液轻轻重悬细胞，37℃孵育15～30分钟。
    
    • 最佳孵育时间需根据细胞类型进行适当的优化。
  • 孵育结束后，1000×g离心5分钟，弃上清，加入37℃预温育的新鲜细胞培养液重悬细胞。
    
  • 用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪进行观察、分析或检测。
    
    • 如果需要在载玻片或盖玻片上固定悬浮细胞，可先用Poly-D-lysine处理载玻片或盖玻片。