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本试剂盒适用于用于从酵母中分离出完整而纯化的线粒体，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

• 本试剂盒三个月内使用可4℃储存，长期可置-20℃。
  
• 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
  
• 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接在第7步后的沉淀中加入上样缓冲液裂解线粒体。
  
• 提取的线粒体一般不能用于进一步DNA提取。
  
• β-巯基乙醇有毒，请注意通风及防护。

• 取新鲜培养的1～5mL酵母培养物(不超过5×10⁷细胞，湿重50mg或者50μL体积)离心后的收集物（4℃，1000×g离心5min）。双蒸水洗一到两次。离心，尽量弃上清。取50μL山梨醇缓冲液洗一次，离心，弃上清。
  
• 酵母沉淀用0.5mL山梨醇缓冲液重悬，加入10mg蜗牛酶，再加入5μL β-巯基乙醇，混匀（如果一次提取样本较多，可按照比例，每0.5mL山梨醇缓冲液，加入10mg蜗牛酶，再加入5μL β-巯基乙醇混匀，混匀后每管样本加入0.5mL重悬酵母，现配现用），30℃水浴1～2小时。4℃，1000×g离心5min，弃上清，得到原生质体。将得到的原生质体用0.5mL原生质体裂解液重悬，再次离心，弃上清，得到原生质体。
  
• 将得到的原生质体用0.5mL原生质体裂解液重悬，并转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨10～20次；
  
• 将研磨物放置合适的离心管，4℃，1000×g离心5min；
  
• 取上清，加入一新的离心管中，4℃，16000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
  
• 在线粒体沉淀中加入0.5mL线粒体清洗液重悬线粒体沉淀，4℃，1000×g离心5min；
  
• 取上清，加入一新的离心管中，4℃，16000×g离心10min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
  
• 用50～100μL线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。