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线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。
本产品用简便的方法和设备即可提取得到完整的植物线粒体。适用于提取新鲜植物样本的线粒体，用于冻存样本的提取时由于冻存过程中大部分线粒体可能会被破坏，线粒体回收率较低。
本试剂盒提取的线粒体核糖体具有生物活性，可用于线粒体功能研究、蛋白提取等各种下游应用。
本试剂盒采用酶法提取线粒体，相较于非酶法提取，回收率提高，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒（相关产品HR0251），非酶法提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，线粒体活性更高，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法稍低。对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
● 离心机● 振荡器● Dounce匀浆机/匀浆器● 涡旋混匀器● PBS ● 100μm细胞筛

组份	50T	100T
试剂A：植物线粒体提取液A	50mL	100mL
试剂B：植物线粒体提取液B	25mL	50mL
试剂C：植物线粒体提取液C	25mL	50mL
试剂D：线粒体保存液D	20mL	40mL

2～8℃保存；有效期一年。


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

• 取500mg～1g新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
  注：
  ● 也可用锋利的刀片划成尽可能小的碎片。
  
• 加入1mL试剂A用组织搅碎机/匀浆机/匀浆器匀浆。
  注：
  ● 有条件的话也可以将叶片组织在液氮中冷冻后稍微捣碎成细的粉末后再进行匀浆。
  
• 将匀浆液用100μm细胞筛过滤。
  注：
  ● 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100×g力条件下离心1分钟，收集上部液体，弃组织沉淀。
  ● 有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将1mL吸头尖稍微剪掉一点使用。
  
• 将滤液在14000×g离心15分钟。弃上清，留沉淀。
  
• 在沉淀中加入0.5mL提取液B，充分混匀。
  
• 置振荡器振荡37℃振荡12～72小时。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。
  ● 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。拟南芥嫩叶最短4小时即可。
  ● 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至12小时以上过夜处理以提高得率。
  
• 在10000×g条件下离心15分钟，弃上清，收集沉淀。
  
• 在沉淀中加入0.5mL提取液C，充分混匀。
  
• 置振荡器振荡10分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 在200×g力离心2分钟。弃沉淀，取上清。
  
• 在1000×g力离心2分钟。弃沉淀，取上清。
  
• 在3000×g力离心3分钟。弃沉淀，取上清。
  
• 将上清10000×g力离心15分钟。弃上清，留沉淀。
  
• 沉淀即为线粒体。
  
• 用400μL线粒体保存液D或其他相应的缓冲液重悬沉淀，置冰箱备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 可以不用试剂D保存线粒体，根据下游实验需要用自己的缓冲液保存即可。
  ● 用试剂D保存线粒体后，需要重新回收线粒体可以在11000×g离心20分钟收集沉淀。

相关搜索：植物线粒体提取试剂盒-酶法，Plant mitochondrial Extraction Kit