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保存：-80℃

产品储存：-80℃保存，6个月有效。
产品组成：
基因型:
MATα,ura3,his3,trp1,LexAop (x6)-LEU2
产品说明：
EGY48菌株是LexA系统酵母双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；Transformation marker为：his3，trp1，ura3，报告基因为：LEU2；报告基因UAS (上游激活序列)来源于LexA op(x6)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达。EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白；报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op(x6)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。EGY48感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存六个月，pGBKT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
使用方法：
1.取100μL冰上融化的EGY48感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2～5μg，Carrier DNA(95-100度5min，快速冰浴，重复一次)10μL，PEG/LiAc 500μL并吸打几次混匀，30度水浴30分钟(15min时翻转6～8次混匀)。
2.将管放42度水浴15min (7.5min时翻转6～8次混匀)。
3.5000rpm离心40s弃上清，ddH2O 400μL重悬，离心30s弃上清。
4.ddH2O 50μL重悬，涂板，29℃培养48-96h。
5.筛选培养基可选本公司SD系列产品，产品链接(http://www.Biorab.com/Column_Content.asp?Column_ID=48766)
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4.EGY48酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27～30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。
相关搜索：EGY48感受态细胞，EGY48 Chemically Competent Cell