产品货号：
KD0581
中文名称：
GV3101感受态细胞
英文名称：
GV3101 Chemically Competent Cell
产品规格：
10×100μL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
保存：-80℃
储存条件：-80℃(12个月)
产品规格：100μL/支
基因型：C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline
产品说明：
GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。
操作方法：
1.取-80℃保存的农杆菌感受态于室温，待其部分融化(冰水混合状态)，插入冰中。
2.每100μL感受态加入0.01～1μg质粒DNA(第一次使用前最好做预实验，确定所加质粒的量)，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5min、液氮5min、37℃水浴5min、冰浴5min。
3.加入700μL无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3h。
4.6000rpm离心1min收菌，留取100μL左右上清，轻轻吹打重悬菌块，涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，28℃培养箱培养2～3天(当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50μg/mL rif，则需要28℃培养72-90h)。
注意事项：
1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2.混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4.利福平浓度不应高于25μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
6.不适用于氨苄青霉素抗性质粒。
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