产品货号：
KD0568
中文名称：
SMD1168感受态细胞(化转)
英文名称：
SMD1168 Chemically Competent Cell
产品规格：
10×100μL
发货周期：
1～3天
产品价格：
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SMD1168是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。SMD1168毕赤酵母适宜的生长温度是28～30℃，一般使用30℃培养，温度超过32℃可能导致细胞的死亡。
SMD1168毕赤酵母是His营养缺陷型菌株，在缺乏组氨酸SC minimal media中无法生长。SMD1168的配套载体是含有His4基因的酵母表达载体，例如pPIC9K,pPIC3.5K。SMD1168基因组中的Pep4基因发生突变，造成蛋白水解酶A活性的丧失，可以保护表达产物免受降解，促进表达量的提高。
| 组分 | 规格 | 保存 |
| SMD1168感受态细胞(化转) | 10×100μL | -80℃，6个月 |
| Carrier DNA(10μg/μL) | 100μL | -20℃，2年 |
| B2溶液(转化液) | 20mL | -20℃，2年 |
| B3溶液(悬浮液) | 11mL | -20℃，2年 |
保存：-80℃，有效期6个月。
注意事项：
- 本菌株的基因型：his4,pep4，表型：His-,pep4-,Mut+。
- 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻Carrier DNA。反复冻融3～5次后需重新变性Carrier DNA。
- 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
- 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
- 毕赤酵母适宜的生长温度是28至30℃，温度超过32℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。
使用方法：
- 取0.1～5μg质粒DNA(线性化质粒加入量5～50μg)和10μL预变性Carrier DNA，加入到未融化的100～200μL感受态细胞上，置于30℃水浴，每隔15 S颠倒混匀，直至感受态细胞刚好完全融化(融化后及时取出)。
注：质粒是否需要线性化，根据实验需求而定。 - 加入1.4mL B2溶液颠倒混匀。30℃水浴60min，每隔20min颠倒混匀
- 3000rpm离心3min弃上清留菌体沉淀，加入1mL B3溶液重悬菌体。
- 3000rpm离心3min弃上清留菌体沉淀，加入100μL B3溶液重悬菌体。
- 将100μL菌液全部涂布到相应的平板培养基，30℃恒温培养3～5天，直至平板出现酵母克隆。
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