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产品说明：
Pgex载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。Pgex是一类以谷胱甘肽(γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸)作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚豪摩尔级的，谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强，因此谷胱甘肽固化琼脂糖形成的亲和层析凝胶GST及其融合蛋白的纯化效率很高，每毫升柱床体积的凝胶能结合8mg融合蛋白。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白，凝胶用3mol/L NaCl的缓冲液再生。
使用说明：
(一)凝胶处理
1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖凝胶的容器，将凝胶混成匀浆。
2.取部分匀浆放入15mL离心管(每100mL细菌培养物需要2mL匀浆)。
3.4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
4.在凝胶中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒数次，混合均匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
5.每毫升凝胶加入1mL冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液放置于冰上待用。
(二)细胞抽提
1.用4mL PBS悬浮100毫升培养基的细胞沉淀。
2.加入溶菌酶至终浓度1mg/mL，冰上放置30分钟。
3.用针筒将10mL的0.2% TritonX-100注入细胞裂解物中，剧烈振动数次均匀。
4.加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL，4℃振动孵育10分钟。
5.4℃ 3000g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。
(三)纯化融合蛋白
1.细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖凝胶匀浆混合，每100毫升细菌培养物加2mL凝胶，于室温轻摇30min。
2.混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
3.沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与凝胶结合的蛋白。
4.4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
5.重复步骤3和4两次，保留结合GST融合蛋白的沉淀。
(四)洗脱或酶解
谷胱甘肽洗脱：
1.配制谷胱甘肽洗脱缓冲液，10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl，pH8.0。
2.沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱凝胶上结合的蛋白。
3.4℃以500g离心5分钟，上清(含洗脱的融合蛋白)移至管中。
4.重复步骤2和3二次，合并三次上清。
蛋白酶解：
1.在结合了融合蛋白的凝胶中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子(根据融合蛋白中的位点选择)，每毫升凝胶加入50单位蛋白酶(溶于1mL PBS)。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2～16小时，用小规模预试验确定精确时间。
2.4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。(GST仍结合在凝胶上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离)。
3.10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。
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