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CM-琼脂糖凝胶CL-6B是将羧甲基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种弱阳离子交换介质。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
1理化指标
*检测条件：层析柱16mm×100mm*柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/L NaCl。
2贮存
产品应密封贮存在4℃～25℃(保存溶液为20%乙醇)，通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃(20%乙醇)。
3应用
本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成正离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
4使用过程
4.1装柱
(1)让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液，对所有的缓冲液进行脱气处理。
(2)检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。
(3)根据需要量取相应量的凝胶，用去离子水清洗掉20%乙醇。
(4)将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
(5)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
(6)打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定(注意压力不要超过填料最大耐压)。
4.2平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，直到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如NaAC、PBS等。
4.3上样
(1)样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。盐浓度太大的样品需要处理后再配。
(2)一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
(3)介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用CM介质时，推荐的操作pH值应在缓冲液pKa的0.5个单位内，并且和目标分子的等电点(pI)相差至少一个pH单位。
对于目标分子的吸附，选择具有适当pH的缓冲液是至关重要的，请参考下表；
Buffers for cation exchange chromatography
4.4洗脱
CM介质可用增大盐浓度或增大pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。
4.5再生
一般用高盐浓度的缓冲液(含1~2mol/L NaCl)洗或增大pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。
4.6在位清洗
(1)对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
(2)对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂类，可用0.1M NaOH去除。清洗完毕后，用至少10倍纯水清洗柱子至中性。
5保存
使用完的填料，用纯水彻底冲洗，最后保存在4℃(保存溶液为20%乙醇)，不能冷冻。
6注意事项
(1)上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用0.45μm的过滤器过滤。
(2)在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.1摩尔。碱会使流速变慢。
(3)不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。
(4)离子交换介质在选择层析柱时，避免使用细长柱，会增加实验操作压力。
相关搜索：CM-琼脂糖凝胶CL-6B，CM Sepharose CL-6B