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本制品是一种以萤光素(luciferin)为底物高信号稳定性检测萤火虫萤光素酶活性的试剂盒。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。本试剂盒的检测原理参考图1。

• 本制品发光信号稳定。本制品的发光信号稳定性相对比较好，1分钟内信号基本保持稳定，信号变动不超过2%，3分钟内的信号变动不超过5%，5分钟内信号波动不超过10%，信号半衰期约40分钟，在发光稳定性方面显著优于增强型萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒(货号：YTB2119)和国外同类产品，特别适用于待测样品数量较多的96孔板中进行萤火虫萤光素酶活性的多孔测定。
  
• 本制品发光强度高。对于相同的细胞样品，本制品的发光效果可以达到增强型检测试剂盒和国外同类产品的约40%，虽然低于增强型试剂盒和国外同类产品，但是发光强度相对已经非常高，可以满足各种常规检测。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平非常低时，推荐使用发光强度和灵敏度更高的增强型检测试剂盒。
  
• 本制品操作简单，读数稳定，检测速度快，从样品制备到完成检测仅需约20分钟。本试剂盒中提供的萤火虫萤光素酶检测试剂为即用型试剂，只需将100μL萤火虫萤光素酶检测试剂与20～100μL裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且发光信号比较稳定，通常5分钟内信号下降不超过10%。
  
• 本制品稳定性好。本试剂盒中的萤火虫萤光素酶检测试剂的稳定性非常好，反复冻融5次对检测效果无明显影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%。在4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果，室温保存3天可保留60%以上的检测效果，37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。萤火虫萤光素酶检测试剂即使仅保留约50%的检测效果，仍可以满足各种常规检测的要求。

报告基因细胞裂解液4℃保存3个月有效，-20℃保存一年有效，-80℃可以长期保存；萤火虫萤光素酶检测试剂-80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3～6个月内使用。

• 萤火虫萤光素酶检测试剂在-20℃保存其检测效果会逐渐下降，保存半年后其发光效果会降低约50%。因此，本制品如果保存于-20℃，推荐在3～6个月内使用。如果订购后可能放置较长时间后再使用，推荐订购在-20℃保存非常稳定的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II。
  
• 为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
  
• 由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测试剂在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后使用。
  
• 尽管经测试萤火虫萤光素酶检测试剂反复冻融5次对其检测效果无明显影响，为保证萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果，第一次解冻后可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。
  
• 检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用黑色96孔板或白色96孔板。
  
• 样品和测定试剂混合后，必须等待1～2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
  
• 为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶的报告基因质粒作为内参，采用双荧光素酶报告基因检测试剂盒进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒的检测。