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NanoLight萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求。NanoLight萤光素酶是一个经过基因工程改造的小分子酶(19.1kDa)，是性能卓越的生物发光报告基因。它使用一种新型底物Furimazine，可产生高强度、辉光型发光。信号强度是萤火虫以及海肾萤光素酶的150倍；超强信号稳定性，半衰期可达2小时。NanoLight萤光素酶的生物发光反应不依赖ATP，自发光背景低，光信号更亮，同时抑制背景发光以获得最高检测灵敏度。

• 检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色细胞培养板。
  
• 由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
  
• 酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
  
• 如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。
  
• NanoLight萤光素酶具有超强信号稳定性，半衰期可达2小时。但是当酶表达量过高时，信号半衰期会缩短，建议优化实验设计方案(如减少质粒转染量)，避免萤光素酶表达量过高。

• 自备材料
  PBS；多道排枪；白色不透光细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。
  
• 检测前准备
  
  • 预先将NanoLight Luciferase Reaction Buffer放置于室温融化。
    
  • 取出NanoLight Luciferase Substrate(50X)，每次开盖前需进行短暂低速离心。
    
  • 根据实际使用量，以50:1的比例将适量的NanoLight Luciferase Reaction Buffer与NanoLight Luciferase Substrate(50X)混匀，室温避光备用。例如：如果需要100mL反应液，则需要加入2mL的检测底物。
    注：建议现配现用，剩余的含有Furimazine底物的反应液在当次实验结束后，直接舍弃，不要留存。
• 操作方法
  
  • 从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置5～15min，恢复至室温。
    注：使用白色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
    
  • 加入检测溶液使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的NanoLight Luciferase Reaction Buffer，加样体积与细胞培养液体积相同并混匀。例如，96孔板通常加入80～100μL培养液，相应加入80μL～100μL检测溶液；384孔板通常加入20～30μL培养液，相应加入20～30μL检测溶液。
    
  • 孵育室温下孵育5～10min。为了使得细胞裂解充分，也可将细胞培养板放在振荡混匀仪或附带振板功能的仪器上，室温条件下，采用中高速振板5～10min。
    注：孵育时间，可根据细胞量进行适当调整，确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果。
    
  • 检测混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测NanoLight Luciferase报告基因活性。
    注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后2小时内完成检测。