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本制品是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，从血液中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取总RNA的试剂盒。提取获得的RNA包含大分子量RNA和小RNA(<200nt)，也常被称为总RNA，可以用于各种常规分子生物学和生化检测等用途。

本试剂盒提取得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。

RNA按照长度可以分为长链RNA和小RNA，长链RNA通常大于200nt，而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA (lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA、siRNA、piRNA、tsRNA、srRNA等。

• 本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的磁珠纯化介质进行RNA分离纯化，能有效避免传统的TRIzol LS法提取时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂。
  
• 本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒无需使用红细胞裂解液去除无核的红细胞，避免RNA降解；采用磁珠纯化，无需繁琐的RNA沉淀步骤，提取操作过程仅15～20分钟。相比于传统的TRIzol LS提取法，本试剂盒的操作流程显著简化，缩短了提取时间，降低了RNA被降解的风险。和国外同类柱纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致。
  
• 本试剂盒提取得到的RNA得率高、纯度高。纯的RNA其A260/A280约为2.0，但在很多仪器上测定时会高于2.0，低于1.9通常认为有蛋白、DNA或者酚等的污染；纯的RNA其A260/A230约为2.0左右或者略高，低于1.9通常认为有碳水化合物、胍盐、多肽或酚等的污染。本试剂盒效果经反复测试，提取得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2，A260/A230通常为1.9～2.1。

除DNase和10×Reaction Buffer以外，室温保存，一年有效。DNase和10×Reaction Buffer置于-20℃保存，一年有效。其中BalbMag RNA磁珠长期不使用时，可以4℃保存，4℃可以保存更长时间。

本试剂盒适用于新鲜、冻存、经EDTA、肝素等抗凝处理或经过RNAstable保存的血液RNA的提取，推荐的血液样品量为100～200μL，本试剂盒小、中和大包装可分别用于10、50和200个样品的RNA提取。

• 首次使用前，结合液和洗涤液II按照说明书或瓶标上的指示加入相应量的无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
  
  • 按结合液∶无水乙醇＝5∶7的比例加入，即2.5mL、12.5mL、50mL结合液分别加入3.5mL、17.5mL、70mL无水乙醇。
    
  • 按洗涤液II∶无水乙醇＝2∶5的比例加入，即3.6mL、18mL、36mL洗涤液II分别加入9mL、45mL、90mL无水乙醇。
• 需自备磁分离装置。
  
• 血液样品推荐使用血液RNA保存液进行保存以保持RNA的完整性。
  
• 如果不使用试剂盒提供的DNase进行处理，本试剂盒提取得到的RNA会含有少量的DNA。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时，需要在使用说明中步骤4后，在磁珠中加入适量DNase进行消化，具体请参考使用说明。
  
• 建议使用推荐的血液量用于RNA的提取，否则可能导致BalbMag RNA磁珠聚集而使基因组DNA消化不充分。如果基因组DNA消化不充分，可以加大DNase的用量或延长孵育时间。DNase如果需要加大，可以考虑订购DNase I溶液。
  
• 本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free，操作时应小心，避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
  
• 对于操作环境中RNA酶的去除，推荐使用核酸酶喷雾清除剂以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。
  
• 本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
  
• 废液收集管在一次提取中需多次使用，切勿中途丢弃。
  
• 结合液、洗涤液中含有乙醇，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

本试剂盒提取RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解，释放出总RNA，然后让RNA特异性地结合到磁珠上，再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将高纯度的RNA洗脱下来。

• 取100～200μL血液(其中红细胞不含RNA)或5～10μL血液(其中红细胞含RNA)10000×g离心5分钟，收集细胞沉淀，按照1∶3的比例在血液样品中加入裂解液，例如200μL的血液样品中加入600μL的裂解液，轻轻吹打5～10次。
  
  • 白细胞的收集和保存在RNAstable中的血液样品，请参考RNAstable血液RNA稳定保存液的使用说明步骤1、2对血液样品进行处理。人、猴、牛、兔、大鼠、小鼠等的红细胞无细胞核，鸟、鱼、蛙等的红细胞有细胞核。红细胞有细胞核会导致相同体积的血液内DNA的含量非常高。
• 加入等体积结合液至裂解液中，轻轻颠倒混匀3～5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。
  
• 将混合物(包括沉淀物)转移至的1.5mL离心管内，加入20μL BalbMag RNA磁珠悬液(使用前务必混匀)，轻柔混匀后，室温放置3～5分钟。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
  
  • 磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
• 加入600μL洗涤液I，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
  
• 选做：如果略去本步骤，通过本试剂盒提取得到的RNA会含有少量基因组DNA。后续如进行某些对基因组DNA残留较敏感的实验时，可在上一步骤洗涤后，在磁珠中加入80μL含2μL DNase的酶溶液(每80μL酶溶液按照71.8μL水加8μL 10×Reaction Buffer再加2μL DNase混合配制而成)，37℃放置消化15～30分钟。消化结束后，不需要进行任何额外的操作，直接进入步骤6。
  
• 加入600μL洗涤液II，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
  
• 重复步骤6一次。
  
• 将离心管室温放置5～10分钟，或置于37℃鼓风烘箱5分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
  加入50～100μL洗脱液，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，室温孵育3～5分钟，其间甩动离心管1～2次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，置于-20℃保存。所得溶液即为纯化的RNA。
  
  • 如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20μL，但洗脱下来的RNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原磁珠再洗脱一次，可提高得率约10～30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15～40%的RNA。