miRNA提取试剂盒

产品货号：

WE0195

中文名称：

miRNA提取试剂盒

英文名称：

miRNA Purification Kit

产品规格：

50T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA，还可以提取siRNA，snRNA等其他小于200nt的小分子RNA，同时也可用于总RNA的提取。本制品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合，独特的裂解液在有效抑制RNases的同时，可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中，如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本制品适用样本范围广，制备的RNA纯度高，可直接用于敏感的下游应用，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。

组分	规格
TRIzox Reagent	60mL
Buffer RWT(浓缩液)	15mL
Buffer RW2(浓缩液)	11mL
RNase-Free Water	10mL
吸附柱RM及收集管	50套
吸附柱RS及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5mL)	50个

保存条件：TRIzox Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂

氯仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

注意事项

预防RNase污染，应注意以下几方面：
- 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
- 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
- 配制溶液应使用无RNase的水。
- 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取的量和质量。
第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)

样品处理
- 组织：将组织在液氮中磨碎。每30～50mg组织加1mL TRIzox Reagent，震荡混匀。样品体积不超过TRIzox Reagent体积的十分之一。
- 单层培养细胞：吸去培养液，加入TRIzox Reagent，每10cm²加入1mL TRIzox Reagent（裂解液用量视培养瓶面积而定）。
- 细胞悬液：离心得到细胞沉淀，弃上清。每5×10⁶～1×10⁷细胞加入1mL TRIzox Reagent（细胞不需洗涤）。
- 血浆或血清：取200μL血浆或血清样本，加入5倍体积TRIzox Reagent，震荡混匀30秒。
样品中加入TRIzox Reagent后反复吹打几次，使其充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
可选步骤：4℃ 12000rpm（~13400×g）离心5分钟，取上清，转入一个新的离心管（自备）中（如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等，可选做此步骤）。
向上清中加入氯仿，每使用1mL TRIzox Reagent加入200μL氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置5分钟。
4℃ 12000rpm离心15分钟，样品分为三层：红色有机相，中间层，无色水相，将上层无色水相移到一个新的离心管（自备）中。
向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇，混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，离心后弃掉吸附柱RM，保留流出液。
向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇，混匀。
将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。
若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
向吸附柱RS中加入700μL Buffer RWT（使用前检查是否加入无水乙醇），12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
向吸附柱RS中加入500μL Buffer RW2（使用前检查是否加入无水乙醇），12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
重复步骤10。
12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30～50μL RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
- RNase-Free Water体积不应小于30μL，体积过小影响回收率。
- 如果要提高RNA的产量，可用30～50μL新的RNase-Free Water重复步骤13。
- 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中，重复步骤13。

方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200nt的小分子RNA)

步骤1~5同方法一。向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇，混匀。
将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
向吸附柱RM中加入700μL Buffer RWT（使用前检查是否加入无水乙醇）,12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
向吸附柱RM中加入500μL Buffer RW2（使用前检查是否加入无水乙醇）,12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
重复步骤9。
12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30～50μL RNase-Free Water，室温放置1分钟，室温12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
- RNase-Free Water体积不应小于30μL，体积过小影响回收率。
- 如果要提高RNA的产量，可用30～50μL新的RNase-Free Water重复步骤12。
- 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中，重复步骤12。

产品目录