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本试剂盒采用可以特异性结合病毒RNA的吸附柱和独特的缓冲液系统，适用于从血清、血浆、尿液、脑脊液等无细胞体液及细胞培养上清液中分离病毒RNA。病毒RNA特异性地结合到硅基质膜上，而污染物则流过该膜。通过两次高效洗涤完全去除蛋白质等杂质，然后用无RNase的水或试剂盒提供的RNase-Free Water洗脱高纯度的病毒RNA。由本试剂盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time RT-PCR和印迹分析等实验。

• 向Proteinase K中加入1.25mL Proteinase K保存液使其溶解，-20℃保存。
  配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
  
• 预防RNase污染，应注意以下几方面：
  
  • 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
    
  • 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
    
  • 配制溶液应使用无RNase的水。
    
  • 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
• 血清或血浆避免反复冻融导致蛋白变性或产生沉淀，减少病毒滴度进而影响提取病毒核酸的产量。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
  
• Buffer GL如果产生沉淀，可在56℃加热使其溶解后室温放置。
  
• 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

• 室温下取200μL血清或血浆加到1.5mL离心管（自备）中。
  注意：不足200μL可以加入0.9% NaCl （客户自备）补足。
  
• 向上步溶液中加入20μL Proteinase K，混匀。
  
• 加入200μL Buffer GL，涡旋震荡15秒。
  注意：不要直接把Proteinase K加到Buffer GL中。
  
• 56℃孵育15分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
  
• 加入250μL无水乙醇，涡旋震荡15秒，室温孵育5分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
  
• 将步骤5得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱RS中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，12000rpm（~13400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer RW2（使用前检查是否加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL无水乙醇，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
  注意：
  
  • 这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
    
  • 推荐步骤：将吸附柱放入一个新的1.5mL离心管（自备）中，打开管盖，56℃烘箱孵育3分钟，使吸附柱的膜彻底干燥。
• 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20～50μL RNase-Free Water，室温放置5分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
  注意：
  
  • RNase-Free Water体积不应小于20μL，体积过小影响回收率。
    
  • 如果要提高RNA的产量，可用20～50μL新的RNase-Free Water重复步骤11。
    
  • 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤11。