总RNA提取试剂Plus

产品货号：

SN0006

中文名称：

总RNA提取试剂Plus

英文名称：

GenZol Total RNA Extraction Reagent Plus

产品规格：

100mL

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

GenZol Reagent Plus是基于异硫氰酸胍/酚的广谱型总RNA提取试剂，具有极强的裂解能力，可在短时间内裂解细胞和组织样本，并有效抑制RNase活性，保证RNA的完整性。GenZol Reagent Plus中的RNA Extraction Buffer可替代氯仿，操作更安全。

本制品适用于次生代谢较少的植物组织（如幼苗、幼叶等）、培养细胞、动物组织、微生物。提取过程可在1h内完成，提取的总RNA纯度高、完整性好，最大限度的去除了蛋白质和基因组DNA等杂质，可以直接用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译及mRNA纯化等实验。

产品特点：

适用范围广。
操作简单快速，整个过程可在1小时内完成。
操作可视，溶液呈粉红色，便于分离水相及有机相。

产品组成：

组分	规格
GenZol Reagent	100mL
RNA Extraction Buffer	20mL

保存：2～8℃，避光，有效期1年。

用户自备：
异丙醇、75%乙醇（用RNase-free水配制）、RNase-free水。

注意事项：

本制品含有苯酚等物质，使用时应穿戴防护物品，避免沾染皮肤、眼睛及衣物，防止口鼻吸入。如不慎沾染皮肤或眼睛，立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生帮助。
使用RNase-free的实验器具，包括枪头和离心管，并且RNA实验用的器具需专门使用，不要用于其它实验，避免交叉污染。

使用方法：

样品准备
- 动物/植物组织样品
  - 取新鲜组织立即用液氮速冻，迅速转移至液氮预冷的研钵中充分研磨，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状(无明显可见颗粒)。
  - 将研磨至粉末状的样品转移到离心管中，每50～100mg样品加入1mL GenZol Reagent，匀浆处理。
  - 室温静置5min（使核酸蛋白复合物完全分离）。
    样品体积一般不要超过GenZol Regent体积的10%，若取样量过多会导致提取的RNA中有DNA污染。
- 贴壁细胞样品
  - 倒出培养液，用1×PBS清洗1次。
  - 每10cm²培养面积生长的细胞中加入1mL GenZol Reagent，轻微晃动，使本制品充分覆盖到细胞表面，使用移液枪反复吹打使细胞裂解。
  - 将含有细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹打直至裂解液中无明显沉淀。
  - 室温静置5min。
- 悬浮细胞样品
  - 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8000×g 4℃离心2min收集细胞。
  - 每5×10⁶～1×10⁷个细胞加入1mL GenZol Reagent，用移液枪反复吹打直至裂解液中无明显沉淀。
  - 室温静置5min。
- 血液样品
  - 直接取新鲜的血液，加入3倍体积的GenZol Reagent（推荐0.2mL全血加入0.6mL GenZol Reagent），充分振荡混匀。
  - 室温静置5min。
- 样品经GenZol Reagent匀浆后，可在-80℃保存至少一个月。
- 可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后12000×g 4℃离心10min以除去不溶物质，取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
向上述裂解液中加入1/5 GenZol Reagent体积的RNA Extraction Buffer，盖好管盖，剧烈振荡15s（彻底混合有利于后续的相分离），溶液呈乳浊状，室温静置5min。
12000×g 4℃离心15min。此时样品分为3层，即上层无色的水相（含RNA）、中间层和下层粉红色的有机相。小心吸取上层水相（水相体积约占GenZol Reagent体积的60%，建议吸取500μL左右，避免吸取到中间层导致基因组DNA的污染）转移至新的离心管中。
加入等体积的异丙醇，上下颠倒混匀，室温放置10min。
12000×g 4℃离心10min，去上清，此时管底会出现白色胶状沉淀。
加入1mL 75%乙醇（用RNase-free水配制）洗涤沉淀。7500×g 4℃离心5min，弃去上清。
重复步骤6。
室温开盖晾干5～10min。加入适量的RNase-free水溶解沉淀，必要时可用移液器轻轻吹打或在55～60℃孵育5～10min，待沉淀完全溶解后将所得到的RNA溶液置于-80℃保存或用于后续试验。
不能使用真空离心机或加热的方法干燥RNA，过分干燥会使RNA难以溶解，导致OD260/OD280值偏低。

常见问题：

RNA降解
- 样品处理或保存不当。尽量使用新鲜样品，取样后立即液氮速冻置于-80℃冰箱保存，尽快使用；
- 样品过量。请参考说明书推荐取样量；
- 环境、试剂或耗材中含有RNase。使用RNase-free的试剂及耗材，建议在通风橱中操作。
RNA得率较低
- 样品研磨或裂解不充分。建议参考说明书充分研磨、振荡样品，使样品充分裂解；
- 取样量较少。适当增加样品量；
- RNA沉淀未完全溶解。RNA不能过分干燥，必要时用移液器轻轻吹打或在55～60℃孵育5～10min。
- 若使用RNA Extraction Buffer提取得率较低，可以更换氯仿进行提取。

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