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TRIzol LS试剂是一种专门用于从液体样本(如细菌、病毒、酵母、血液、组织悬液)中提取高质量RNA的试剂。与TRIzol Reagent相比，唯一区别在于其组分浓度，TRIzol LS试剂是一种用于提取液体样本RNA的浓缩试剂，故提取相同量样本所需的用量相对较少。TRIzol LS试剂能够充分裂解细胞，溶解细胞内含物，高效抑制RNA酶活性，从而可保持RNA的完整性。提取过程方便快速，整个操作在一小时内便可以完成。应用TRIzol LS试剂获得的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot、Dot blot、ployA筛选、体外翻译、RNase保护分析和基因克隆等后续分析。

样本量及RNA产量：

样本类型	样本量	产量
人全血	250μl	3～10μg
白细胞	1×106个	10～20μg
细胞	1×106个	8～15μg
肌肉/脑等组织	25mg	10～25μg
肝脏组织	25mg	50～100μg

储存：2-8℃避光保存，可保存2年。
自备试剂：氯仿，异丙醇，70％乙醇（DEPC水配置），RNase
注意：
1．请勿应用该试剂直接处理大块固体组织，否则会影响RNA的产量。
2．该试剂含有强变性剂，请勿直接于皮肤接触或吞咽，若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服，戴手套。

操作方法：

一、实验前准备：
RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。
注意事项：
1．尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前用0.1%DEPC水溶液在37℃处理12h，然后在120℃高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。
2．用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60min）或DEPC水处理相关容器，使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。
3．RNA实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染

二、实验操作

TRIzol LS使用方法：

	液体样本： 全血、血清、病毒液	悬浮细胞、酵母	动植物组织	贴壁细胞
1.样品预处理	粪便等固体样品，可用PBS重悬样品，并匀浆后，3000rpm离心5分钟，取上清作为病毒液样品。其它样品直接使用即可。	如样本中细胞含量低，则需要采用离心法沉淀细胞后使用250μl灭菌水重悬细胞再进行下面操作。	将样品转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状。	每10cm2生长的培养细胞中倒出培养液，用PBS清洗一次，尽可能移除多余的溶液。
2.加入TRIzol-LS	取250μl液体样品加入到装有750μl TRIzol-LS的1.5ml EP管中。	向250μl液体样品中加入750μl TRIzol-LS。	将研磨好的组织加入到装有750μl TRIzol-LS的1.5ml EP管中。	加入750μl TRIzol-LS，使裂解液均匀分布于细胞表面，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落并转移至1.5ml EP管中。
3.裂解样品	加入TRIzol-LS后立即手腕用力上下颠倒至细胞、组织粉末等分散均匀，无块状物。室温静置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
4.加水	液体样品不需要再额外加水。		加入250μl Rnase-Free H2O混合均匀，静置2分钟。
5.加氯仿	加入200μl氯仿，手腕用力振荡15s，室温放置2分钟。
6.离心分层	13000rpm离心10分钟，吸取600μl无色上清至新的1.5ml EP管中。
7.加异丙醇	向上述600μl上清液中加入600μl异丙醇，手腕用力上下颠倒数次，于-20℃放置5分钟。
8.离心沉淀总RNA	13000rpm离心10分钟，小心倒掉上清，留取底部总RNA沉淀。
9.漂洗总RNA	向沉淀中每管加入1ml 70%乙醇，上下颠倒数次，13000rpm离心5分钟，小心倒掉上清，留取底部RNA沉淀。
10.重复漂洗一次	重复步骤9再洗涤一次。
11.挥发残留乙醇	倒掉洗液，再次短离心10s后，用10μl Tip头吸干剩余的洗液，置于室温使乙醇挥发干净（～20分钟）。
12.溶解总RNA	每管加入20～100μl TE Buffer或Rnase-Free H2O溶解总RNA

常见问题分析：
1．抽提率低。
  可能原因：
  a.样品裂解或匀浆处理不彻底；
  b.RNA沉淀未完全溶解。
2．A260/A280＜1.65。
  可能原因：
  a.检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中；
  b．样品匀浆时加的组织量过多；
  c．分层后，吸取上清液不足500μl；
  d．吸取水相时混入了有机相。
3．DNA污染过多。
  可能原因：
  a.样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多；
  b.样品中含有有机溶剂。
  解决方法：使用该试剂通常基因组DNA污染含量<0.1ng/μl，如需要彻底去除DNA的污染，请使用Rnase-Free DNase I（货号：A3001）消化去除基因组DNA污染。如使用cDNA第一链反转录试剂盒(含基因组去除剂)（货号：MT0015）则无需提前消化去除基因组DNA污染，该试剂盒中包含了去除基因组DNA污染的试剂。
相关搜索：液体样本TRIzol试剂，TRIzol LS Reagent