产品货号：
MT0010
中文名称：
TRIzol试剂
英文名称：
TRIzol Reagent
产品规格：
100ml
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
TRIzol Reagent是一种可用于提取动植物和细菌来源的组织或细胞RNA的制品。样本在进行匀浆的过程中，TRIzol Reagent能够充分破坏细胞，裂解细胞内含物，同时可高效抑制RNA酶的活性，从而保持RNA的完整性。TRIzol Reagent具有很强的广谱性，可以适用于各种样品的总RNA提取，提取过程方便快速，整个操作在一小时内便可以完成。该试剂可用于小量样品（20-100mg组织、1×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）；对人、动物、植物组织、细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot、Dot blot、ployA筛选、体外翻译、RNase保护分析和基因克隆。
样本量及RNA产量：
储存：2-8℃避光保存，可保存2年。
注意：该试剂含有强变性剂，请勿直接于皮肤接触或吞咽，若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服，戴手套。
自备试剂：氯仿，异丙醇，70％乙醇（DEPC水配置），RNase-Free H2O。
操作方法：
一、实验前准备：
RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。
注意事项：
1.尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前用0.1%DEPC水溶液在37℃处理12h，然后在120℃高压灭30分钟以除去残留的DEPC。
2.用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60min）或使用上述方法进行DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用RNA实验用的一次性塑料容器)，使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。
3.RNA实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。
二、实验操作：
TRIzol Reagent的使用量情况如下：
TRIzol 使用方法：
常见问题分析：
1．抽提率低。
可能原因：
a.样品裂解或匀浆处理不彻底；
b.RNA沉淀未完全溶解。
2．A260/A280＜1.65。
可能原因：
a.检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中；
b．样品匀浆时加的组织量过多；
c．分层后，吸取上清液不足500μl；
d．吸取水相时混入了有机相。
3．DNA污染过多。
可能原因：
a.样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多；
b.样品中含有有机溶剂。
解决方法：使用该试剂通常基因组DNA污染含量<0.1ng/μl，如需要彻底去除DNA的污染，请使用Rnase-Free DNase I（货号：MT0090）消化去除基因组DNA污染。如使用cDNA第一链反转录试剂盒(含基因组去除剂)（货号：MT0015）则无需提前消化去除基因组DNA污染，该试剂盒中包含了去除基因组DNA污染的试剂。
相关搜索：TRIzol试剂，TRIzol Reagent
样本量及RNA产量：
| 样本类型 | 样本量 | 产量 |
| 白细胞 | 1×106个 | 10～20μg |
| 植物材料 | 25mg | 10～20μg |
| 细胞 | 1×106个 | 8～15μg |
| 肌肉/脑等组织 | 50mg | 10～25μg |
| 肝脏组织 | 50mg | 100～300μg |
储存：2-8℃避光保存，可保存2年。
注意：该试剂含有强变性剂，请勿直接于皮肤接触或吞咽，若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服，戴手套。
自备试剂：氯仿，异丙醇，70％乙醇（DEPC水配置），RNase-Free H2O。
操作方法：
一、实验前准备：
RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。
注意事项：
1.尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前用0.1%DEPC水溶液在37℃处理12h，然后在120℃高压灭30分钟以除去残留的DEPC。
2.用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60min）或使用上述方法进行DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用RNA实验用的一次性塑料容器)，使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。
3.RNA实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。
二、实验操作：
TRIzol Reagent的使用量情况如下：
| 10cm2贴壁培养细胞 | 1ml |
| 1×106～10×106悬浮培养细胞 | 1ml |
| 50-100mg的普通组织样品（肌肉等） | 1ml |
| 30-50mg的特殊组织样品（肝、脾等） | 1-2ml |
| 30-50mg的植物材料 | 1ml |
| 白细胞（1×106） | 1ml |
TRIzol 使用方法：
| 贴壁细胞 | 悬浮细胞、酵母、细菌 | 动植物组织 | |
| 1.样品预处理 | 每10cm2生长的培养细胞中倒出培养液，用PBS清洗一次，尽可能移除多余的溶液。 | 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000rpm离心2分钟，弃上清，加入50μl无菌水重悬细胞至无明显沉淀。 | 将样品转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状。 |
| 2.加入TRIzol | 加入1ml TRIzol，使裂解液均匀分布于细胞表面，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落。将细胞的裂解液转移至1.5ml EP管中。 | 加入1ml TRIzol。 | 将研磨好的组织加入到装有1ml TRIzol的1.5ml EP管中。 |
| 3.裂解样品 | 加入TRIzol后立即手腕用力上下颠倒至细胞、组织粉末等分散均匀，无块状物。室温静置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。 | ||
| 4.加氯仿 | 加入200μl氯仿，手腕用力振荡15s，室温放置2分钟。 | ||
| 5.离心分层 | 13000rpm离心10分钟，吸取600μl无色上清至新的1.5EP管中。 | ||
| 6.加异丙醇 | 向上述600μl上清液中加入600μl异丙醇，手腕用力上下颠倒数次，于-20℃放置5分钟。 | ||
| 7.离心沉淀总RNA | 13000rpm离心10分钟，小心倒掉上清，留取底部总RNA沉淀。 | ||
| 8.漂洗总RNA | 向沉淀中每管加入1ml 70%乙醇，上下颠倒数次，13000rpm离心5分钟，小心倒掉上清，留取底部RNA沉淀。 | ||
| 9.重复漂洗一次 | 重复步骤8再洗涤一次。 | ||
| 10.挥发残留乙醇 | 倒掉洗液，再次短离心10s后，用10μl Tip头吸干剩余的洗液，置于室温使乙醇挥发干净（～20分钟）。 | ||
| 11.溶解总RNA | 每管加入20～100μl TE Buffer或Rnase-Free H2O溶解总RNA。 | ||
常见问题分析：
1．抽提率低。
可能原因：
a.样品裂解或匀浆处理不彻底；
b.RNA沉淀未完全溶解。
2．A260/A280＜1.65。
可能原因：
a.检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中；
b．样品匀浆时加的组织量过多；
c．分层后，吸取上清液不足500μl；
d．吸取水相时混入了有机相。
3．DNA污染过多。
可能原因：
a.样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多；
b.样品中含有有机溶剂。
解决方法：使用该试剂通常基因组DNA污染含量<0.1ng/μl，如需要彻底去除DNA的污染，请使用Rnase-Free DNase I（货号：MT0090）消化去除基因组DNA污染。如使用cDNA第一链反转录试剂盒(含基因组去除剂)（货号：MT0015）则无需提前消化去除基因组DNA污染，该试剂盒中包含了去除基因组DNA污染的试剂。
相关搜索：TRIzol试剂，TRIzol Reagent