产品货号：
MT0001
中文名称：
组织/细胞microRNA提取试剂盒
英文名称：
miR-Quant microRNA Extraction Kit From Tissue/Cell
产品规格：
25T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒广泛适用于动物组织、细胞和植物组织(多糖多酚含量不高)等样本中提取小RNA(＜200nt)，具有操作步骤简单、重复性最好、产率较高的特点。核酸提取的成功与否、提取质量的好坏对后续实验起着至关重要的作用。使用TRIzol试剂提取总RNA，对总RNA中包含的部分小RNA进行研究，该方法的缺点是总RNA中microRNA的比例较小，同时由于mRNA的干扰，会导致后续反转录和RealTime PCR实验效率很低，很难获得理想的实验结果，且结果不可靠。为此，在探索miRNA分子功能的过程中开发了本试剂盒，使用该试剂盒提取的RNA中，长度在15～200nt范围的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA。使用该试剂通过一步上柱即可获得高纯度小RNA，可在45分钟内完成miRNA的提取。
图例：小鼠肌肉组织的小RNA提取
保存：室温，有效期2年。
miRNA Reagent A溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。
一、组织样本提取
二、细胞样本提取
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图例：小鼠肌肉组织的小RNA提取
- A1-A2：TRIzol试剂
- B1-B2：A公司microRNA提取试剂
- C1-C2：我司miRNA提取试剂盒。
| 样本类型 | 样本量 | 产量 |
| 动物组织（肝脏、脾脏、肾脏等） | 10～30mg | 0.2～10μg |
| 动物组织（骨骼肌、心肌） | 20～40mg | 0.1～5μg |
| 动物组织（脑、皮肤） | 20～50mg | 0.1～2μg |
| 植物组织（多糖多酚含量不高的） | 20～40mg | 0.1～2μg |
| 细胞 | 0.5～10×106个 | 0.1～2μg |
| 组分 | 25T | 100T |
| miRNA Reagent A | 7.5mL | 30mL |
| miRNA Reagent B | 10mL | 40mL |
| miRNA吸附柱 | 25套 | 100套 |
| RNase-Free TE Buffer | 5mL | 5mL |
保存：室温，有效期2年。
miRNA Reagent A溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。
一、组织样本提取
- 向1.5mL EP管中加入300μL miRNA Reagent A。植物组织则再加入10μL β-巯基乙醇，混合均匀。
- 在液氮条件下充分将组织研磨粉碎，将一定的样品量（见样本使用量表）研磨成粉状的组织加入到上述300μL miRNAReagent A中，立即手腕用力震荡至组织粉末彻底溶解于裂解液中。室温静置5分钟以充分裂解细胞。
注意：将组织加入到miRNA Reagent A后要迅速将组织震散，否则易引起组织成团状，不容易裂解。如发生成团状，务必用移液器将团状组织吹打松散。 - 向上述裂解完毕的裂解液中加入350μL miRNA Reagent B，上下颠倒混合均匀。13000rpm离心5分钟，吸取550μL上清液，转移到新的1.5mL EP管中。
- 向上述溶液中加入200μL无水乙醇，手腕用力震荡数次，室温放置5分钟。
- 13000rpm离心10分钟，转移700μL上清液到新的1.5mL EP管中。
- 向上述溶液中加入300μL异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。
- 分两次将上述溶液倒入到miRNA吸附柱中，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
- 向吸附柱中加入700μL 75%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
- 向吸附柱中加入500μL无水乙醇洗涤一次，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
- 吸附柱13000rpm空离心2分钟，去掉残留的乙醇。
- 将吸附柱放入到新1.5mL EP管中，室温放置2分钟，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μL RNase-Free TE Buffer，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，洗脱产物即为提取的miRNA。
二、细胞样本提取
- 贴壁细胞：胰酶消化细胞后，离心收集细胞沉淀。用100μL的1×PBS重悬细胞后，加入300μL miRNA Reagent A颠倒混合均匀，室温放置5分钟。
- 悬浮细胞：直接离心后，收集细胞沉淀。用100μL 1×PBS重悬细胞后，加入300μL miRNA Reagent A颠倒混合均匀，室温放置5分钟。
- 向上述裂解完毕的裂解液中加入250μL miRNA ReagentB，上下颠倒混合均匀。13000rpm离心5分钟，吸取550μL上清液，转移到新的1.5mL EP管中。
注意：加入细胞体积数与miRNA Reagent B总体积数为350μL。如加入50μL细胞，则miRNA Reagent B使用300μL。 - 向上述550μL上清溶液中加入200μL无水乙醇，手腕用力震荡数次，室温放置5分钟。
- 13000rpm离心10分钟，转移700μL上清液到新的1.5mL EP管中。
- 向上述溶液中加入300μL异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。
- 分两次将上述溶液倒入到miRNA吸附柱中，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
- 向吸附柱中加入700μL 75%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
- 向吸附柱中加入500μL无水乙醇洗涤一次，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
- 吸附柱13000rpm空离心2分钟，去掉残留的乙醇。
- 将吸附柱放入到新1.5mL EP管中，室温放置2分钟，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μL RNase-Free TE Buffer，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，洗脱产物即为提取的miRNA。
- 本方法提取的小RNA，95％以上为小RNA（＜200nt），有时会残留一些＞200nt的RNA，通常残留的＞200nt RNA不影响后续试验操作。
- 本试剂盒提取的小RNA由于不含mRNA等大分子量的RNA，因此更适合做后续反转录试验，从而进行定量试验。
- 使用本试剂盒提取的miRNA浓度通常在50ng/μl左右，取5～10μL即可用于电泳检测。取1～2μL即可用于我司TaqMan miRNA反转录试剂盒进行反转录反应（货号：MT0006），并使用我司优化的microRNA荧光定量PCR试剂盒(TaqMan探针法，货号：MTTxxxxx）。
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