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本试剂盒基于磁珠法专门用于从各种常见的细菌中快速提取总RNA，得到的RNA可用于后续RT-PCR、Northern Blot、芯片分析、体外翻译、polyA筛选和RNase保护分析等试验。

• 既可用于革氏阴性细菌，也可用于革氏阳性细菌。
  
• 所RNA纯度高，OD260/OD280一般在2.0左右。
  
• 性价比高于进口同类产品。
  
• 与市场上大多数基于磁珠法的自动核酸纯化仪兼容。

1. 新鲜配制溶菌酶溶液：根据样品数量用自备的TE缓冲液和本试剂盒提供的溶菌酶干粉配制合适体积的、浓度为4mg/mL的溶菌酶溶液，放冰上待用。一次革氏阳性细菌RNA小量提取需要200μL溶菌酶溶液，一次革氏阴性细菌RNA小量提取需要20μL溶菌酶溶液。未用完的溶菌酶溶液不建议保存后重复使用。
   
2. 在1.5mL塑料离心管中离心收集0.2～1.5mL新鲜细菌（细菌总数不得超过10⁹个细菌）。
   
   由于细菌RNA半衰期十分短，只有2～5分钟，所以必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌才能提到高质量的RNA。细菌必须立即使用，不能静置。
   
   
3. 12000×g室温离心1分钟后弃上清，如果是革氏阳性细菌，则加入200μL第1步制备的4mg/mL的溶菌酶溶液，彻底重悬细菌，常温放置5～10分钟。如果是革氏阴性细菌，则加入180μL TE缓冲液和20μL第1步制备的4mg/mL的溶菌酶溶液，彻底重悬细菌，常温放置3～5分钟。

4. 试剂分装：按下表将各种试剂装在96孔板对应的孔中。
   

   孔位	试剂名称和体积
   第3/9列孔	700μL通用磁珠洗涤液1
   第4/10列孔	700μL通用磁珠洗涤液2
   第5/11列孔	700μL通用磁珠洗涤液2
   第6/12列孔	55μL DNA洗脱液

   
   
5. 样品孔的准备：按下表把重选菌液、血清血浆游离DNA溶液A、磁珠结合液、RNA专用磁珠分装在96孔板的低1/7列孔和第2/8列孔中。
   

   孔位	试剂名称和体积
   第1/7列孔	重选菌液：100μL 细菌RNA纯化溶液A：300μL 细菌RNA纯化溶液B：300μL 磁珠结合液：120μL RNA专用磁珠：20μL
   第2/8列孔	重选菌液：100μL 细菌RNA纯化溶液A：300μL 细菌RNA纯化溶液B：300μL 磁珠结合液：120μL RNA专用磁珠：20μL

   血清血浆游离DNA溶液A在4℃放置后可能会产生结晶，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
   
   
6. 打开核酸提取仪。
   
7. 按下表设置程序。
   

   孔位	名称	等待时间 （min）	混合时间 （min）	吸磁次数	容积 （μL）	混合速度	温度
   1	结合1	0	10	1	840	中	关闭
   2	结合2	0	10	1	840	中	关闭
   3	洗涤1	0	1	1	700	中	关闭
   4	洗涤2	0	1	1	700	中	关闭
   5	洗涤2	0	1	1	700	中	关闭
   6	洗脱	4	5	1	55	中	关闭
   4	去磁	0	1	0	700	快	关闭

   
   
8. 将装好试剂及样本的96孔板放到核酸提取仪中，把磁力套插到仪器中，运行程序。
   
9. 提取结束后，在核酸提取板的第6列孔把DNA转移至1.5mL离心管中，DNA样品可以直接用于PCR，也可放-20℃长期保存。