产品货号:
KD2162
中文名称:
血液RNA提取试剂盒
英文名称:
Blood RNA Extract Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
保存:2~8℃
产品说明:
Biorab血液RNA快速提取试剂盒适用于从动物血液样品中快速提取总RNA。
纯化好的总RNA可用于mRNA分离,RT-PCR,Northern杂交等下游分子实验。
抗凝剂的使用,不影响RNA的提取。
操作步骤:(样品裂解,样品纯化,RNA收集)
离心条件均优先选择4℃,室温离心也可以。
一:样品裂解
1.12,000rmp室温离心3min收集0.2~1.5mL抗凝全血的细胞沉淀。
2.在血细胞沉淀中,加入1mL的裂解液,用枪头充分吹打混匀。
注意:如离心后细胞沉淀的量目测大于200μL,建议只留取200μL沉淀做裂解,否则会影响裂解效果。
二:样品纯化
1.在上述裂解液中加入0.3mL的RNA纯化液,剧烈震荡30 s。
2.再加入0.2mL的氯仿,剧烈震荡30 s。
3.12000rpm离心3~5min,取上清到新的2mL的离心管中(避免触及分层界面,下层会有大量DNA和蛋白污染,避免污染。)
4.上清中加入等体积的RNA结合液,颠倒混匀,分多次加入同一个RNA纯化柱中(如有絮状物或沉淀产生,一并加入纯化柱中)。12000rpm离心1min,弃穿透液。
在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液,室温12000rpm离心半分钟,弃穿透液。重复洗涤一次。(洗涤液使用后拧紧瓶盖,防止挥发)
三:RNA收集
1.将结合有RNA的纯化柱12000rpm离心1min,甩干乙醇。(乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验,或者适当延长离心时间,将有助于乙醇的去除)
2.弃收集管,将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中(自备),加入30-50uLRNA溶解液,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者-80℃存放。
3.如果要提高RNA产量,加入30-50uLRNA溶解液重复洗脱一次,合并两次穿透液;如果要提高RNA浓度,使用第一次的洗脱液加回到吸附柱中重复洗脱。
注意:建议RNA用于下游实验之前,先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后,会有清晰的28S和18S条带,以及中间弥散的mRNA条带,其中28S条带是18S条带亮度的1.5~2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。如果条带不清晰或者弥散,可能是提取过程中或者材料保存过程中RNA发生了降解。小于200bp的RNA分子不能有效结合到吸附柱上。A260/A280比值1.8~2.0对应RNA纯度90~100%之间。
相关搜索:血液RNA提取试剂盒,Blood RNA Extract Kit