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本试剂盒用于从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

• 下面操作步骤中的离心条件均优先选择4℃，室温离心也可以。

• 样品裂解
  
  • 液氮研磨法：将50～200mg新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入1mL裂解液重悬后，将裂解物加入1.5mL离心管中，震荡混匀1min。
    
    • 低温可能导致裂解液有白色悬浮物，请置于65℃水浴充分溶解后使用。裂解液含巯基乙醇，请于通风橱内操作。
• 样品纯化
  
  • 在裂解物中加入0.3mL的RNA纯化液和0.2mL自备氯仿，在震荡器上震荡30s，溶液呈均匀的乳浊状。
    
  • 12000rpm离心3～5min，取上清到新的1.5mL离心管中。
    
    • 避免触及分层界面，下层会有大量DNA和蛋白污染，避免污染。
  • 上清中加入等体积的RNA结合液，颠倒混匀，分两次加入同一个RNA纯化柱中(如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中)。12000rpm离心1min，弃穿透液。
    
  • 在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12000rpm离心半分钟，弃穿透液。重复洗涤一次。
    • 洗涤液使用后拧紧瓶盖，防止挥发。
• RNA收集
  
  • 将结合有RNA的纯化柱12000rpm离心1min，甩干乙醇。(乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验，或者适当延长离心时间，将有助于乙醇的去除)
    
  • 弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中(自备)，加入30～50μL RNA溶解液，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者-80℃存放。
    
  • 如果要提高RNA产量，加入30～50μL RNA溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高RNA浓度，使用第一次的洗脱液加回到吸附柱中重复洗脱。
    • 建议RNA用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的28S和18S条带，以及中间弥散的mRNA条带，其中28S条带是18S条带亮度的1.5～2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。如果条带不清晰或者弥散，可能是提取过程中或者材料保存过程中RNA发生了降解。小于200bp的RNA分子不能有效结合到吸附柱上。A260/A280比值1.8~2.0对应RNA纯度90～100%之间。