产品货号:
KD2155
中文名称:
病毒RNA提取试剂盒
英文名称:
Virus RNA Extraction Kit
产品规格:
50T
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1~3天
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保存:2~8℃
病毒RNA提取试剂盒II型是I型(沉淀法)基础上利用吸附柱纯化RNA样品的试剂盒。适用于血清(血浆)等液体样品中微量病毒RNA的提取。
适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
提取的RNA可用于RT-PCR和qRT-PCR。
操作步骤:(样品裂解,样品纯化,RNA收集)
一:样品裂解
1.在1.5mL离心管中加入0.1~0.2mL液体病毒样品。如果病毒需要富集,可以将1.5mL液体在4℃下24,000g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL后继续操作。
2.加入0.6mL裂解液VR,振荡30 s混匀后室温放置10分钟。
注意:裂解液VR在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前请置于65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
二:样品纯化
1.将溶液全部转移到RNA纯化柱中,室温放置2分钟。
2.13000g室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。
3.在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液,室温12000rpm离心半分钟,弃穿透液。
三:RNA收集
1.将结合有RNA的纯化柱12000rpm离心1min,甩干乙醇。(乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验,或者适当延长离心时间,将有助于乙醇的去除)
2.弃收集管,将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中,加入30~50μL DNase&RNase-free水,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者-80℃存放。
3.如果要提高RNA产量,加入30~50μL DNase&RNase-free水重复洗脱一次,合并两次穿透液;如果要提高RNA浓度,使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。
四:疑难问题
病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子,每种RNA有很多拷贝),同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一),样品中病毒数往往又不是很多,使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少,所以操作中十分容易丢失。另外,由于得到的核酸绝对量很少,不能使用电泳和测OD检测,只能通过PCR或RT-PCR检测,而PCR或RT-PCR的条件又需要优化,所以要确定提取是否成功十分不容易。
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