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本试剂盒是从总RNA中分离纯化高纯度mRNA的试剂盒。大多数真核生物的mRNA在其3'端都有Poly(A)尾，采用特殊设计的耦联Oligo磁珠与之杂交实现mRNA的分离。纯化得到mRNA可用于cDNA文库构建、二代测序、Northern blot等相关实验。

• 建议RNA实验使用的器具、试剂和无菌水专用。
  
• 请使用RNase-Free和DNase-Free的枪头、离心管进行实验。
  
• 本试剂盒中Lysis/Binding Buffer在实验过程中请小心吹打，避免产生过多泡沫影响实验结果。

• mRNA捕获磁珠预处理：
  
  • 将Oligo磁珠从4℃冰箱取出，室温放置5min，涡旋混匀。吸取10μL Oligo磁珠于Nuclease-Free RCR管中，置于磁力架上1min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
    
  • 将Nuclease-Free RCR管从磁力架上取出，加入50μL Lysis/Binding buffer，小心吸吹磁珠，将磁珠混匀后放置在磁力架上1min，待溶液澄清，小心吸弃上清。
    
  • 再次加入50μL Lysis/Binding buffer重复洗涤一次。
    
  • 最后加入50μL Lysis/Binding buffer，将磁珠重悬于50μL Lysis/Binding buffer，室温放置备用。
• 样品准备：将总量0.1～4μg的总RNA用Nuclease-Free ddH2O稀释至50μL，并置于冰上备用
  
  总RNA样品中应无DNA、盐离子(Mg²⁺、胍盐)、有机试剂残留，否则可能导致RNA降解或捕获效率降低。
• 捕获反应体系：
  

  成分	用量
  处理后的mRNA捕获磁珠	50μL
  总RNA	50μL

• 将配制好的反应体系吹打混匀后，执行以下程序(置于PCR仪中，启用热盖99～105℃均可)：
  

  温度	时间
  65℃	2min
  20℃	5min
  4℃	-

• 将反应液取出置于磁力架上放置1min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。加入200μL的Wash Buffer，吹吸混匀，置于磁力架上1min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
  
• 加入50μL Nuclease-Free ddH2O重悬磁珠，执行以下程序(置于PCR仪中，启用热盖99～105℃均可)：
  

  温度	时间
  65℃	2min
  20℃	5min
  4℃	-

• 向步骤6反应液中加入50μL Lysis/Binding buffer，反复吹吸混匀，20℃放置5min。
  
• 将步骤7的反应液置于磁力架上，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
  
• 加入200μL的Wash Buffer，吹吸混匀，置于磁力架上1min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
  
• 将样品从磁力架上取出，加入6～15μL Nuclease-Free ddH2O，用移液器吹打混匀，室温放置2min。
  
  洗脱体积可根据需求自行调整，尽量充分洗脱产物。
  
  
• 置于磁力架上放置2min，待溶液澄清后，小心吸取上清至新的Nuclease-Free RCR管。
  
• 洗脱样品可立即用于RNA测序文库构建或其他分析应用，也可在-20℃保存过夜或在-80℃保存一个月。