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组织RNA室温保存液(RNA-Be-Locker A)是一种在较高温度下保存RNA样品的非冻型无毒溶液，它能迅速渗入细胞内，通过高效抑制RNase的活性而保存RNA的完整性。

• 操作简单，将组织剪薄浸没在RNA-Be-Locker A中即可使其RNA不被降解。
  
• 替代液氮，样品无需液氮、干冰或-80℃冰箱保存，尤其适用于临床和野外样品的快速大规模采集。
  
• RNA完整，提取的RNA的质量跟液氮保存的样品相比不相上下。
  
• 方便运输，处理过的样品能在25℃保存一周，使样品邮寄和运输变得容易和便宜。
  
• 反复冻融，经RNA-Be-Locker A处理的样品可反复冻融20次而不影响最终提取的RNA的质量。
  
• 结果准确，RNA-Be-Locker A进入细胞十分快速，基因表达在发生应急改变前就得以锁定，故RNA分析更能反映取样时的真实情况。
  
• 可比性强，RNA-Be-Locker A能减少大规模样品处理中的误差，增加各次实验数据间的可比性，对大规模基因表达谱的分析尤其有用。
  
• 兼容性广，处理过的样品可以使用TRIzol等试剂提取其RNA，还可直接用于组织切片，免疫学和流式细胞分析而不影响RNA的质量。

• RNA-Be-Locker A保存新鲜组织样品
  
  • 估计完全浸没样品所需要RNA-Be-Locker A的体积(1g组织需10mL)。
    
  • 标记收集管并加入估计所需量的RNA-Be-Locker A。
    
  • 以最快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
    注：鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不剪切直接放入本制品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
    
  • 将组织碎块完全浸没于收集管的RNA-Be-Locker A中。
    
  • 将收集管存放于温度适当的地方，存放时间不能超过该温度下的最长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在4℃放置过夜后再转移到最终的温度。注：将样品转移到-20℃或-80℃前，需要倒弃保护液。
    常见存放温度与其最长存放时间关系为如下表。
    

    保存温度	保存时间
    37℃	一天(保存三天的样品RNA有部分降解)
    18～25℃	一周(保存两周的样品RNA有轻微降解)
    2～8℃	一个月
    20℃和-80℃	长期

  • 若要使用样品，对于-20℃或-80℃保存的样品在室温下融化，对于室温或者2～8℃保存的样品，用消毒过的镊子将组织碎块从保护液中取出。
    
  • 立即开始RNA提取或进行其他处理(如将样品分割成更小的碎块再重新保存等)。
    注：样品可以反复冻融二十次而其RNA质量不受到影响。
• RNA-Be-Locker A保存培养细胞，悬浮细胞，细菌和RNA病毒
  
  • 标记收集管。
    
  • 将待样品转移到离心管中，离心收集细胞，弃上清。
    注:处理含病毒的样品(如血浆)可直接从步骤d开始。
    
  • 用冰浴的缓冲液洗一次。
    
  • 将细胞悬浮在少量缓冲液中。
    
  • 加入五到十倍体积的RNA-Be-Locker A，混均;对病毒样品，加入两到三倍体积的RNA-Be-Locker A，混均。
    
  • 将收集管存放于温度适当的地方，存放时间不能超该温度下的最长存放时间。如果要存放在-20℃或-80℃，需先在4℃放置过夜后再转移到最后温度条件(将样品转移到-20℃或-80℃前，需要倒弃保护液)。
    注：样品存放温度与其最长存放时间关系为如下表。
    

    保存温度	保存时间
    37℃	一天(病毒样品为一月)
    18～25℃	一周(病毒样品为一月以上)
    2～8℃	一个月
    -20℃和-80℃	长期

  • 取出样品，室温下融化(-20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化)。
    
  • 加入一倍体积的预冷的缓冲液(如PBS)，用常规离心法收集细胞并用缓冲液洗一次。病毒样品可免去此步骤。
    
  • 细胞直接用于RNA的提取或其他处理。

• 保存RNA病毒样品有何注意的地方？
  病毒样品在4℃和4℃以下一般都很稳定，可直接保存。需要邮寄或远距离运输的话才需要用RNA-Be-Locker A。