产品货号:
GS2266
中文名称:
RNase-Free DNA清除试剂盒
英文名称:
RNase-Free DNase Kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒是利用RNase-Free DNase I结合优化的吸附柱上反应体系,可在总RNA抽提过程中将残留的基因组DNA轻松清除,无需再进行酚氯仿抽提,使操作更方便、安全,尽可能地避免RNA降解。纯化后的总RNA可以直接用于RNA印迹分析、斑点杂交、Poly(A)选择、体外翻译、RT-PCR分析、构建cDNA文库等RNA研究。
- RNA提取过程中提供柱上高效消化DNA的技术。
- 本试剂盒可与总RNA小量提取试剂盒(货号:GS2268)配合使用。
- 整个过程可在40min内完成。
- 可完全除去DNA污染。
- 得率高,重复性好。
- 无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀。
组分 | 50T | 100T |
RNase-Free DNase I(1U/μL) | 1.5mL | 3mL |
Buffer RDD | 3mL | 6mL |
DW Solution | 36mL | 72mL |
RNase-Free Water | 2mL | 4mL |
保存:DNase I应保存于-20℃,其他组分4℃。
- 优化的Buffer RDD用于吸附柱中DNase的消化。这种缓冲液在溶液中也可高效地进行DNase消化。
- 提供的RNase-Free DNaseⅠ为液态形式。您可将其分装成单份,避免反复冻融。
- 使用前请按以下表格往DW当中加入无水乙醇,并在瓶身做好标记。
50T 100T DW Solution 36mL 72mL 无水乙醇 4mL 8mL 最终体积 40mL 80mL - 操作RNA相关实验时要十分小心。从RNA样品的准备到后续的纯化和分析均应保持在RNase-free的环境中。使用RNase- free离心管、枪头、凝胶。始终佩戴手套
- 离心速度至少达到12000×g的小型离心机
- RNase-Free的移液枪和枪头
- RNase-Free离心管(1.5mL或2mL)
- 乙醇(96~100%)
- 准备DNaseⅠ工作溶液:
加入10μL RNase-free水和40μL Buffer RDD到1.5mL RNase-free离心管中,混合均匀,然后加入30μL DNaseⅠ(30U),将离心管颠倒温和混匀。离心管置于冰上,进行下一步骤。- 避免将工作液漩涡混匀。DNaseⅠ对物理变性非常敏感。
- 与总RNA小量提取试剂盒配合使用去除DNA。
完成总RNA小量提取试剂盒说明书步骤4后,向吸附膜中央加入80μL DNaseⅠ工作液。25~37℃静置20~30min。- 最佳反应温度为25~37℃。
- 加入0.35mL DW Solution到吸附柱中,室温静置3min。
- 这一步骤用于去除DNaseⅠ。
- 检查DW Solution是否已加入乙醇。
- 这一步骤用于去除DNaseⅠ。
- 室温12000×g离心1min,倒掉收集管中的液体
- 继续总RNA小量提取试剂盒说明书的步骤5-9。
- 也可以与其他柱式总RNA抽提试剂盒配合使用。
- 提取的RNA可立即使用或-70℃长期保存。
- 前期处理后仍残留DNA污染
- 消化基因组DNA时选择最佳反应温度(25~37℃)。
- DNase溶液溶解后不要重新冷冻。
- 工作液避免漩涡混匀。DNaseⅠ对物理变性非常敏感。
- 减少原始材料使用量。
- 您可尝试延长DNaseⅠ消化时间。
- 消化基因组DNA时选择最佳反应温度(25~37℃)。
- RNA降解
- 在RNase-free的环境分装DNaseⅠ。
- 使用新鲜的样品。对于需要冻存的样品,确保样品采集后立即被放入液氮冷冻,并妥善保存于-70℃。
- 我们推荐用液氮处理组织样品,并立即将样品裂解。
- 所有操作步骤均戴手套。经常更换手套。
- 推荐使用RNase-free的离心管。
- 在RNase-free的环境分装DNaseⅠ。
- 后续酶促反应被抑制
- 去除DNaseⅠ和洗涤步骤均应严格参照说明书操作。
- 来源于DW或RPE Solution的残留乙醇可抑制下游酶促反应。吸附柱于12000×g离心2min去除残留的乙醇。
- 去除DNaseⅠ和洗涤步骤均应严格参照说明书操作。
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