产品货号:
GS0093
中文名称:
柱式酵母总RNA提取试剂盒
英文名称:
Spin Column Yeast Total RNA Purification Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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酵母细胞壁结构复杂,用一般的裂解液很难破壁。使用Trizol等试剂提取酵母RNA,也只能获得5s rRNA。本试剂盒采用蜗牛酶与裂解液(Buffer Rlysis-YS)联合作用,5分钟有效破碎酵母细胞壁。不会造成机械破壁中的RNA损伤,确保RNA的完整性。同时采用进口的吸附膜对游离的RNA进行纯化,获得的RNA纯度较高。获得的总RNA可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。
- 操作简单,无需研磨、匀浆等过程。
- RNA纯度高,OD260/OD280比值一般为2.0左右。
组分 | 50次 | 100次 |
Buffer Rlysis-YS | 22mL | 44mL |
Buffer YK | 12mL | 24mL |
RPE Solution (concentrate) | 11mL | 22mL |
DEPC-treated ddH2O | 2.5mL | 5mL |
Snailase Reaction Buffer | 50mL | 100mL |
Snailase Storage Buffer | 5mL | 10mL |
Snailase | 600mg | 1200mg |
吸附柱及收集管 | 50套 | 100套 |
保存:4℃
- 自备试剂:无水乙醇、酚:氯仿(体积比为25:24,pH4.5)等。
- Snailase比较难溶解,请提前将Snailase加入Snailase Storage Buffer,涡旋混匀使酶溶解,如溶解不完全,可以将Snailase置于冰箱4℃过夜溶解。待完全溶解后分装,-20℃冰箱保存备用。
- 按瓶身标签说明在RPE Solution中加入相应量的无水乙醇,混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧,以保持RPE Solution中的乙醇含量。(11mL RPE Solution中应加入44mL无水乙醇;22mL RPE Solution中应加入88mL无水乙醇。)
- 每次使用前请检查Buffer Rlysis-YS、Buffer YK请于是否有沉淀,如有沉淀请于37℃溶解沉淀后使用。
- 取1mL过夜培养的酵母菌液,加入1.5mL RNase-free离心管中,室温10000rpm离心1min,彻底弃掉培养基,收集菌体。
- 1mL过夜培养的酵母培养物离心收集,湿重约为20mg。
- 收集菌体后可用500μL DEPC-treated ddH2O漂洗一次,10000rpm离心1分钟,弃上清,进一步去除残留的培养基。
- 1mL过夜培养的酵母培养物离心收集,湿重约为20mg。
- 按每20mg菌体湿重取600μL Snailase Reaction Buffer加入步骤1中的离心管,同时加入50μL实验前准备好的Snailase,37℃水浴5min。10000rpm 4℃离心2min,弃上清。
- 立即加入400μL Buffer Rlysis-YS,震荡混匀,65℃水浴5min。
- 将离心管取出,冰浴5min后加入200μL Buffer YK,混匀,12000rpm 4℃离心5min,取上清。
- (可选)向上清液中加入等体积酚:氯仿(体积比为25:24,pH4.5),混匀。12000rpm 4℃离心5min,取上清液。
- 此步骤可提高RNA的纯度和得率。
- 向上清中加入1/2体积无水乙醇,充分混匀。
- 即使出现沉淀也不要离心。
- 将吸附柱放入收集管中,用移液器将溶液全部加至吸附柱中,静置1min,室温12000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- 如需彻底清除RNA当中的DNA,可以搭配RNase-Free DNA清除试剂盒(货号:GS2266)。
- 将吸附柱放回收集管中,加入500μL RPE Solution,静置1min,室温10000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- RPE Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
- 重复步骤8。
- 将吸附柱放回收集管中,室温12000rpm离心2min。
- 此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残留的乙醇,乙醇的残留会影响RNA的产量和后续的实验。
- 此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 将吸附柱放入RNase-free的1.5mL离心管中,在吸附膜中央加入30~50μL DEPC-treated ddH2O,静置2min,12000rpm离心2min,将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
- RNA在-70℃保存,以防降解,或保存在RNA保存液(货号:GS2322)中。
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