柱式总RNA提取试剂盒

产品货号：

GS0042

中文名称：

柱式总RNA提取试剂盒

英文名称：

SPIN-10 Column Total RNA Purification Kit

产品规格：

20次|100次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒采用RLT Solution裂解液能迅速裂解细胞，释放出RNA的同时灭活RNase。结合试剂盒采用的特殊吸附膜，大大增强了RNA的得率。得到的RNA纯度好，完整性高。该试剂盒适用于各种细胞或组织中的RNA抽提，可用于Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。

适用范围广。
操作简单快速，整个过程20分钟左右完成。
提取的RNA纯度高，污染少。

组分	20次	100次
RLT Solution	10mL	50mL
RW Solution	15mL	75mL
RPE Solution	5mL	25mL
DEPC-treated ddH2O	1mL	5mL
吸附柱及收集管	20套	100套

保存：室温

自备试剂：无水乙醇、PBS、DEPC等。
按瓶身标签说明在RPE Solution中加入4倍体积的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持RPE Solution中的乙醇含量。若RPE Solution由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
去酶处理：RNase是导致RNA降解最主要的物质，非常稳定。在一些极端的条件下可暂时失活，限制因素去除后又迅速复性。常规的酸、碱以及加热方法不能使RNase完全失活。RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，因此制备RNA时必须经常更换手套，同时戴上一次性口罩和卫生帽，并保证环境清洁。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等可以使用百奥莱博的固相表面RNase清除剂(货号：GS2320)去除RNase，对于实验溶液试剂的处理可以使用百奥莱博的液相RNase清除剂(货号：GS1945)。
样品保存：匀浆后，样品可在-70℃放置一个月左右；提取的RNA样品可以在70%酒精中-20℃保存2个星期以上；如果需要长期保存，可选择使用百奥莱博的RNA保存液(货号：GS2322)保存。

悬浮培养细胞：取约5×10⁶个细胞，3000rpm离心5min，彻底去掉上清，加入350μL RLT Solution，充分混匀，用匀浆器匀浆30sec或用20-G（0.9mm）针头抽吸5次。
贴壁培养细胞：可以通过胰蛋白酶的消化收集细胞后再裂解。倒掉培养基，用无菌PBS洗涤细胞，然后用含0.1%～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞。在细胞从培养瓶表面脱落以后，取约5×10⁶个细胞，3000rpm离心5min，彻底去掉上清，加入350μL RLT Solution，充分混匀，或者按照每6cm2
culture plate中，直接加入350μL RLT Solution，用枪头吸打裂解细胞。用匀浆器匀浆30sec或用20-G（0.9mm）针头抽吸5次。
细菌：取适量的指数生长期细菌（最多可达1×109），5000rpm离心3～5min，彻底弃掉培养基，加100μL含溶菌酶的TE Buffer，振荡混匀。加入350μL RLT Solution，剧烈振荡，以保证细菌充分裂解。如果有不溶物存在，10000rpm离心2min，吸取上清到一个RNase-free 1.5mL离心管中。
- G-菌使用的TE中溶菌酶浓度为400μg/mL，室温酶解3～5分钟；G+菌使用的TE中溶菌酶浓度为3mg/mL，室温酶解5～10分钟。
动植物组织和丝状真菌：称取不多于30mg（动物组织）或100mg（植物组织或丝状真菌）的样品，液氮充分碾磨成粉末状，液氮挥发完之前，将样品转移到一个RNase-free 1.5mL离心管中。立即加入450μL RLT Solution到样品中，剧烈振荡混匀，12000rpm离心5min，吸取上清到一个RNase-free 1.5mL离心管中。

向裂解样品中加入1/2体积无水乙醇，充分混匀。
- 即使出现沉淀也不要离心。
将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液全部加至吸附柱中，静置2min，8000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
将吸附柱放回收集管中，加入500μL RW Solution，静置1min，10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
将吸附柱放回收集管中，加入500μL RPE Solution，静置2min，10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
- RPE Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
重复步骤4一次。
将吸附柱放回收集管中，10000rpm离心2min。
- 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
将吸附柱放入RNase-free的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30～50μL DEPC-treated ddH2O，静置5min，12000rpm离心2min，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
- RNA在-70℃保存，以防降解，或保存在RNA保存液(货号：GS2322)中。
- 若想提高RNA得率，可重复步骤7一次。
- 请勿使用小于40μL的洗脱液进行洗脱。

现象	原因	解决方法
加入裂解液后非常粘稠，样品转移比较困难	样品用量太多	提高RLT Solution量，用多只吸附柱纯化同一个样品。
首次离心柱子堵塞	样品太多，或裂解不完全	提高离心力，或减少样品量或提高RLTSolution用量。
RNA产率很低	起始样品太多，裂解不完全，或RNA仍在柱子上	减少样品量或提高RLT Solution量，或将DEPC-treated H2O预热到50℃，加到柱上后再50℃保温2分钟，再洗脱RNA。
微量DNA污染	操作不规范	严格按照要求执行。如果已经存在DNA污染，可采用非酶DNA清除剂A(货号：GS2311)去除。
RNA发生降解	样品存放时间太长	所用组织或细胞应该是新鲜的，如果没有被及时液氮冻存，会导致组织或细胞中的RNA完全或部分降解。建议使用组织RNA室温保存液(货号：GS2319)等保存未能够及时提取的细胞或组织。提取的RNA溶液-70℃保存。
A260/A280过低	裂解或匀浆不完全，裂解液中没有加入β-巯基乙醇	改变匀浆方式，降低样品用量，如不肯定，请再加入β-巯基乙醇，稍过量的β巯基乙醇不会影响RNA的纯化，用DNase I（RNase-free）处理，测定时用10mmol/L Tris-HCl pH7.5稀释样品，比色杯用0.1mol/L NaOH，1mmol/L EDTA漂洗，再用RNase-free水处理。

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