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适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100mg组织、5×10⁶细胞)，也可用于大量样品(>1g组织/>10⁷细胞)，提取的总RNA质量高，可用于Northern Blot、Dot Blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。

• 液氮、研钵或匀浆器
  
• 经RNase free处理的移液器吸头、EP管等耗材
  
• 低温高速离心机、低温冰箱

• 样品保存：加入Trizol Reagent混匀后，样品可在-70℃放置1～2月；RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周；如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。
  
• Trizol Reagent和RNA分离液含有腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 样品准备
  
  • 贴壁细胞：
    ① 直接裂解：直接在培养瓶/皿中加入Trizol Reagent裂解细胞，每10cm2面积加1mL，用移液器吹打混匀。
    ② 胰蛋白酶消化：用无菌PBS洗涤细胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，以下参考悬浮细胞相关操作步骤。
    
  • 悬浮细胞：无需清洗细胞，直接5000～6000g离心5min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不完全，降低RNA收获率，每5×10⁶～10⁷动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1mL Trizol Reagent，充分振荡混匀。
    
  • 组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织，50～100mg组织在液氮中充分研磨或者加入1mL Trizol Reagent研磨或者用匀浆器匀浆处理，样品体积一般不超过Trizol Reagent体积的10%，研磨要迅速，以1min为佳。
    
  • 血液：取0.5～1mL新鲜或冻存的血液，12000g离心5min，去除血浆，加入1mL Trizol Reagent，充分振荡混匀。
• 核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5～10min后，充分振荡，反复1～3次)，将裂解样品或匀浆液室温静置5～10min，使核蛋白与核酸完全分离。
  
• 样品分层：加入0.2mL RNA分离液，振荡15s，室温静置2～3min，12000g 4℃离心10～15min，上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA在上层水相。
  
• 沉淀RNA：吸取上层水相(约500μL)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质，否则会有染色体DNA污染)，加入等体积RNA沉淀液混匀，室温放置15～20min，12000g 4℃离心10min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。
  
• 洗涤RNA：加入1mL RNA洗涤液轻轻洗涤沉淀，室温放置5～10min，7500g 4℃离心5min，弃上清，室温干燥5～10min，不宜过分干燥，否则RNA难以溶解。
  
• 溶解RNA：加入30～50μL RNase-free ddH2O充分溶解，-70℃长期保存或直接用于后续试验，对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品沉淀用RNA保存液溶解。