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DNase溶液(无RNase活性)图片
产品货号:
BTN90903
中文名称:
DNase溶液(无RNase活性)
英文名称:
RNase-Free DNase Solution
产品规格:
1000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品是从牛胰DNase中精制的无RNase污染的DNase,专门用于降解RNA样品中的DNA污染。

产品特点:
  • 高效,能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平。
  • 同时降解单链DNA和双链DNA。
  • 不含RNase,可以保证RNA分子完整性不受任何影响。
  • 反应条件经过优化,可以用于快速降解硅胶膜上吸附的DNA,也可以用于快速降解液体反应体系中的DNA。
  • 可以用于总RNA提取和体外转录中去除DNA。也可用于切口平移(Nick Translation)和DNase印迹法研究DNA-蛋白质相互作用。


产品组成:
成分规格
RNase-free DNase(1U/μL)500μL×2
10×DNase Buffer1mL
50mM EDTA溶液1mL
说明书1份

储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:

一、去除RNA样品中污染的基因组DNA(仅供参考,本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
  • 在一无RNA酶的离心管中配制50μL的反应液:
    成分用量
    RNA样品1μg
    10×DNase Buffer1μL
    RNase-free DNase(1U/μL)1μL
    自备的RNase inhibitor(40U/μL)0.5~1μL(可不加)
    补超纯水到10μL

  • 混匀,短暂离心,37℃放置30分钟;
  • 加入2μL 50mM EDTA溶液,65℃放置15分钟。此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解,也可以使用酚/氯仿抽提去除DNase,然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上,也可以使用本公司的RNAadsorp
    试剂盒进行柱式纯化,回收RNA。
  • 电泳检测是否去除了基因组DNA,然后进行后续实验。


二、除去硅胶膜离心吸附柱上的DNA(仅供参考,本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
  • 在柱式法提取过程中,完成洗涤步骤。
  • 配制50μL DNase工作液。
    成分用量
    10×DNase Buffer5μL
    RNase-free DNase(1U/μL)10μL
    自备的RNase inhibitor(40U/μL)0.5~1μL(也可不加)
    补超纯水到50μL

  • 加在离心吸附柱中间,室温放置5~30分钟。
  • 加入0.5mL自备洗柱液洗涤两次。
  • 用RNA洗脱液洗脱即得无DNA的RNA样品。


三、除去RNA体外转录反应中的DNA模板(仅参考,本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
  • 按2U RNase-free DNase/μg DNA模板的比例在RNA体外转录反应中加入RNase-free DNase。
    注意:酶的最佳用量也许需要优化。
  • 37℃放置15分钟。
  • 加入2μL 50mM EDTA溶液,65℃放置15分钟;此步可以灭活DNase。RNA在加热时容易水解,也可以使用酚/氯仿抽提去除DNase,然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上,也可以使用本公司的RNAadsorp试剂盒(需另购)进行柱式纯化,回收RNA。


四、用于切口平移法(Nick Translation)DNA探针标记(仅供参考,本试剂盒不含RNase-free DNase以外的所需试剂)
  • 按下表设置切口平移标记反应:
    成分用量
    10×DNA聚合酶I缓冲液2.5μL
    3 dNTP mixture,1mM each1.25μL
    标记核苷酸:非标记核苷酸混合(3:7,1mM)1μL
    RNase-free DNase(0.002U/μL,见注)1μL
    DNA聚合酶I(10U/μL)0.5~1.5μL
    模板DNA0.25μg
    加水到25μL

    注:稀释RNase-free DNase的缓冲液为1×DNA聚合酶I缓冲液:50mM
  • 15℃放置15~60分钟。
  • 加入10μL 50mM EDTA溶液。
  • 65℃放置15分钟灭活酶。
  • 所得探针可以纯化后使用,也可以直接使用。

相关搜索:DNase溶液(无RNase活性)RNase-Free DNase Solution
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