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石蜡包埋切片是珍贵的分子生物学研究材料，但是其保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行RT-PCR的RNA样本，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。

• 一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
  
• 适用于甲醛固定和非甲醛固定的两类切片。
  
• 含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。
  
• 沉淀法，比过柱法和磁珠法能更好的回收高度降解的RNA片段。
  
• 能有效去除基因组DNA的污染，避免DNA的干扰。
  
• 得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。

• 将5片厚度为6～8μm的石蜡包埋切片转移到1.5mL塑料离心管(最好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL石蜡包埋切片RNA纯化溶液A，在振荡器上以最大速度振荡10秒。
  
• 加入75μL石蜡包埋切片RNA纯化溶液B，在振荡器上以最大速度振荡10秒。
  
• 7000×g室温离心2分钟，溶液将形成上下两个相，其中组织切片位于下层。
  
• 小心吸弃上层液体。
  
• 将离心管放入真空离心机中抽干下层的液体，一般需要一小时。
  
• 加入150μL蛋白裂解液，55℃保温过夜。
  
• 短暂离心，95℃保温10分钟。
  
• 加入0.5mL RNA提取液，充分震荡半分钟。
  
• 加入0.1mL自备氯仿，振荡器上充分振荡混均30秒。
  
• 13000～5000×g室温离心3～5分钟。
  
• 将上清液（约0.6mL）转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。
  
  • 下层有机相（蓝色）和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的DNA。
• 在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡30秒混匀。
  
• 14000×g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。
  
  • 如果需要提高RNA回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。
• 小心吸弃上清液，不要吸弃RNA沉淀。
  
• 在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇，振荡混匀30秒。
  
• 14000×g室温离心1分钟。
  
• 小心吸弃上清液。
  
  • 不要吸弃RNA沉淀。
• 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。
  
  • 不要吸弃沉淀，此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
• 室温放1～2分钟后立即加入50μL RNase-free水使RNA沉淀溶解。样品立即使用或存放于-80℃待用。
  
  • 千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。

• RNA完整性的电泳检测
  
• RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
  
• RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。