产品货号：
BTN120503
中文名称：
藻类RNA柱式提取试剂盒
英文名称：
Algae RNA Column extraction kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是专门针对藻类RNA提取开发的高效RNA提取试剂盒，提取得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
保存：室温，其中溶液B需置于4℃保存，有效期一年。
溶液B为淡黄色液体，使用前请观察颜色是否正常。若溶液B有油粒状颗粒及分层，属正常现象，不影响使用。
RNA检测：
- 操作更加简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
- RNA纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数藻类中的多糖污染。
- 适用于常见的各种海水和淡水藻类的RNA提取。
| 组分 | 规格 |
| 藻类RNA提取溶液A | 50mL |
| 藻类RNA提取溶液B | 15mL |
| 藻类RNA提取溶液C | 50mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
保存：室温，其中溶液B需置于4℃保存，有效期一年。
溶液B为淡黄色液体，使用前请观察颜色是否正常。若溶液B有油粒状颗粒及分层，属正常现象，不影响使用。
- 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100～200mg藻类（湿重）。
- 海水藻类需用纯净水洗涤2次以免藻类沉淀中残留的海水盐分干扰藻类RNA提取溶液A的作用。
- 液氮研磨破碎样品：取100～200mg离心得到的新鲜藻类细胞沉淀放入含液氮的研钵中，迅速将其研磨成粉末后，将粉末转移到标记的塑料离心管中，加入1mL藻类RNA提取溶液A，立即剧烈振荡20秒，充分混匀。
- 藻类RNA提取溶液A在4℃放置容易产生沉淀，用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
- 将液氮研磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中。
- 在离心管中加入0.3mL的藻类RNA提取溶液B和0.2mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状（颜色将根据提取的藻类不同而不同）。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
- 室温12000～15000g离心3～5分钟，两相间将有细胞破碎物。
- 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μL上清液不取。
- 加入等体积的藻类RNA提取溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生（对某些含糖量高的藻类，属于正常现象），千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
- 先将一半的溶液(如有沉淀，则将一半的悬浊液)转移到离心吸附柱中，13000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，13000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7步加入藻类RNA提取溶液C后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量改为0.4、0.3和0.3mL。
- 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50～100μL RNA洗脱液，室温放置1～2分钟。
- 13000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
RNA检测：
- RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。如果电泳发现DNA污染严重建议减少起始样本的用量，已经纯化好的RNA可另购RNase-free DNase去除DNA污染。
- RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
- RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
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