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本试剂盒采用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

• 完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
  
• 简捷，单个样品操作一般可在25分钟内完成，世界上最简单快速的试剂盒。
  
• 独有的植物RNA助提剂PlantAid可以有效结合多糖多酚，提高清除效果。
  
• 世界领先适应性极其广泛，可以提取包括棉花、月季、拟南芥、杨树等数百种国内外试剂盒提取失败的样品。
  
• 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值高达2.1～2.2，基本无DNA残留，可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

• 不合适的储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃～25℃）进行。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

• 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
  
• 需要自备乙醇，研钵(可选)。
  
• 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!
  
• 裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
  
• 关于DNA的微量残留：
  一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留，本试剂盒采用独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜已经清除了绝大部分的DNA残留，在大多数RT-PCR扩增过程中极其微量的DNA残留影响不是很大，如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时注意以下几点。
  
  • 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
    
  • 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
    
  • 将RNA提取物用RNase-free的DNase I处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁，请联系我们索取具体操作说明书。
    
  • 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。购买微量DNA柱式吸附清除试剂盒前可先索取具体操作说明书。
• 关于复杂植物样品提取残留较多DNA的情况有两个选项：
  
  • 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。购买微量DNA柱式吸附清除试剂盒前可先索取具体操作说明书。
    
  • 部分较复杂的植物样品提取时，可能残留较多DNA，可以尝试植物RNA提取试剂盒(货号：ALH036)。ALH036是在本试剂盒基础上，采用基因组DNA清除柱技术可以有效清除DNA残留，在大多数情况下，可以将DNA残留清除到紫外下观测不可见。
• 关于特别复杂难提取植物样品提取失败或者产量低的情况：
  一些特别复杂的植物样品提取，如葡萄果实，蓝靛果果实，百合鳞茎，土豆块茎等，本试剂盒裂解液RLT无法提取，需选择多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒。一些样品产量较低，也可以尝试多糖多酚植物RNA快速提取试剂盒，配有强力裂解液CLB选项，在很多情况下，可以提取复杂样品或者明显提高产量。

• 直接研磨法（推荐）：
  
  • 新鲜植物组织称重后取100mg～200mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg～200mg放入研钵），加入10体积（1mL）RLT和1体积（100μL） PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLT立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
    
    • PLANTaid是提取多糖多酚次级代谢产物色素含量丰富的困难样品不可缺少成分。
  • 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13000rpm离心5～10分钟，沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid。
    
  • 取480μL裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
    
  • 立刻接操作步骤的步骤3。
• 液氮研磨法（提取复杂，易降解样品时推荐此法）：
  
  • 取500μL裂解液RLT，转入1.5mL离心管中，加入50μL PLANTaid混匀备用。
    
  • 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50mg～100mg细粉转入上述装有RLT和PLANTaid的离心管，立即用手剧烈振荡20秒，充分裂解。
    
  • 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。
    
  • 将裂解物13000rpm离心5～10分钟，沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid。
    
  • 取裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
    
  • 立刻接操作步骤的步骤3。
    
    • 以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用1mL的裂解液RLT和100μL PLANTaid和100mg～200mg的样品。
• 将混合物(每次小于720μL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm离心2分钟，弃掉废液。
  
  • 确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。
• 加700μL去蛋白液RW1，室温放置1分钟，13000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 加入500μL漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13000rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μL漂洗液RW，重复一遍。
  
• 将吸附柱RA放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  
• 取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30～50μL RNase-free water （事先在70～90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。
  
• 如果预期RNA产量>30μg，加30～50μL RNase free water重复步骤7，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。
  
  • 洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15～30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

• 按照植物RNA提取试剂盒(货号：ALH034)操作步骤操作，直到做完操作步骤3。
  
• 取45μL DNase I buffer和5μL RNase free DNase I在离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液）。
  
• 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
  
• 向吸附柱RA中央加入50μL的DNase I工作液，室温（20℃～30℃）放置15分钟。
  
  • 直接将工作液滴在膜中央上向膜四周浸润充分和膜接触，不要让工作液滴在O型垫圈或是离心柱管壁上挂壁或者挂在垫圈上不能充分和膜接触。
  
  
• 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30～60秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
  
• 接操作步骤5完成后续步骤。