植物RNA提取试剂盒

产品货号：

ALH033

中文名称：

植物RNA提取试剂盒

英文名称：

Universal Plant RNA Extraction Kit

产品规格：

50T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒适用于快速提取植物组织RNA，采用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，DNase直接在柱上消化残留DNA，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

完全不使用有毒的β-巯基乙醇/苯酚/氯仿，也不需要乙醇沉淀等步骤。
简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成，世界上最简单快速的试剂盒。
配套DNase I柱上消化，得到的RNA不残留DNase消化，可直接用于反转录荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。
世界领先，是同类产品中适应性最广泛的试剂盒，可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。
多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达2.0～2.2，无DNA残留，可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。

组分	规格	保存
裂解液RPA	50mL	室温
去蛋白液RW1	40mL
漂洗液RW	10mL
RNase-free H2O	10mL
RNase-free吸附柱RA和收集管	50套
RNase-free DNase I	250μL	-20℃
DNase Buffer	1.25mL×2	-20℃

保存：按标签指示条件保存，有效期一年。

保存事项

常温成份不合适的储存于低温（4℃或-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15～25℃）进行。
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!
所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
需要自备乙醇，研钵(可选)。
裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

直接研磨法（推荐）：
- 新鲜植物组织称重后取100～200mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100～200mg放入研钵），加入1mL裂解液RPA 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
- 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13000rpm离心5～10分钟，沉淀不能裂解的碎片。
- 取480μL裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
- 立刻接操作步骤的步骤3。
液氮研磨法：
- 取500μL裂解液RPA，转入1.5mL离心管中。
- 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50～100mg细粉转入上述装有RPA的离心管，立即用手剧烈振荡20秒，充分裂解。
- 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。
- 将裂解物13000rpm离心5～10分钟，沉淀不能裂解的碎片。
- 取裂解物上清（在不超过RNA吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
- 立刻接操作步骤的步骤3。
  - 以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用1mL的裂解液RPA和100～200mg的样品。
将混合物(每次小于720μL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm离心2分钟，弃掉废液。
- 确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。
加350μL去蛋白液RW1，室温放置1分钟，13000rpm离心30秒，弃掉废液。
- 如果不需要做荧光定量PCR，仅仅做普通的反转录，克隆基因片段，可以省略DNA酶柱上消化的步骤，具体就是第4步骤的“加350μL去蛋白液RW1”改成“加700μL去蛋白液RW1”，同时省略步骤5、6、7。
DNase I工作液配制：取45μL DNase I buffer和5μL RNase free DNase I在离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液）。
向吸附柱RA中央加入50μL的DNase I工作液，室温（20～30℃）放置15分钟。
- 注意直接将工作液滴在膜中央上，不要让工作液滴在O型圈或是离心柱管壁上。
向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
加入500μL漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13000rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μL漂洗液RW，重复一遍。
将吸附柱RA放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30～50μL RNase-free water（事先在70～90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。
如果预期RNA产量>30μg，加30～50μL RNase free water重复步骤10，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。
- 洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15～30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

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