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3×Flag多肽是一种常用于通过竞争性结合Anti-Flag抗体，从而在免疫沉淀时洗脱与Anti-Flag抗体结合的Flag融合表达蛋白的多肽。本制品不仅可以用于抗Flag亲和凝胶（货号：YTB4326)免疫沉淀时Flag融合表达蛋白的洗脱，也可以用于常规的Anit-Flag抗体免疫沉淀时Flag融合表达蛋白的洗脱。

3×Flag多肽竞争性洗脱Flag融合表达蛋白后，洗脱后的样品中不含Anti-Flag抗体的轻链和重链，可以有效解决免疫沉淀后Western检测时轻链和重链的干扰问题。普通的免疫沉淀，通常是通过加入上样缓冲液煮沸从而时Flag融合表达蛋白进入到溶液中，但此时Anti-Flag抗体的轻链和重链也会进入到溶液中，并很可能会干扰后续的Western检测。

3×Flag多肽由23个氨基酸组成，含有3组Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp重复多肽。在C端的8个氨基酸组成经典的Flag标签(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;DYKDDDDK)。

• 溶液装的-20℃保存，至少一年有效。粉末装也可以4℃保存，一年有效。
  
• 由于蛋白的每次冻融均会引起部分失活，所以溶液装或粉末装配制成溶液后须分装后于-20℃或更低温度冻存，以避免反复冻融。

• 对于粉末装，由于微量的多肽在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或不可见的多肽层，所以在打开管盖前，建议在离心机中约8000～12000×g离心10～30秒，使附着在管盖或管壁上的多肽聚集于管底。
  
• 对于粉末装，使用TBS进行溶液，一般用移液枪的枪头轻吹几下或者轻轻摇晃瓶子，即可使多肽完全溶解。请勿用vortex剧烈振荡，以免多肽变性而失活；溶液装可直接用于后续配制。
  
• 免疫沉淀样品的Flag竞争洗脱法：本方法为非变性法，洗脱效率高，且洗脱后的样品中不含Flag抗体的轻链和重链。
  
  • 3×Flag多肽洗脱液的配制：根据样品量确定洗脱液的用量，取一定量3×Flag多肽溶液用TBS溶液进一步稀释3×Flag多肽溶液至150μg/mL，即为3×Flag多肽洗脱液。
    
  • 每个免疫沉淀样品加入100μL 3×Flag多肽洗脱液(150μg/mL)，冰浴并摇晃孵育30分钟～2小时，为了提高洗脱效率，可延长孵育时间或重复洗脱。3×Flag多肽洗脱液体积一般为凝胶悬液的5倍。
    
  • 4℃，6000×g离心30秒，小心转移上清至新管中，上清即为洗脱的Flag融合蛋白。注意不要吸到凝胶。
• 洗脱的Flag融合蛋白置于4℃待用，或者-20℃长期保存。