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BalbDesalt 6FF样品脱盐柱(>400kD,20mL，适配AKTA层析系统)是一种简单、快速、高效地使用Balbrose 6FF基质分离大分子量物质与小分子量物质的预包装即用型层析柱，俗称脱盐柱，主要用于去除病毒颗粒、大分子量蛋白质、超螺旋DNA、多糖等样品的盐离子、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。本脱盐柱使用的填料为Balbrose 6FF，填料粒径为45～165μm，可分离分子量>400kDa的蛋白质或其它大分子样品，柱床体积为70mL，建议上样量为2～20mL，本制品可与层析系统(如ÅKTA层析系统)连接使用。

BalbDesalt 6FF样品脱盐柱(>400kD,20mL，适配AKTA层析系统)具有标准1/16英寸接口，使用方便。本脱盐柱为1/16"倒锥形接口，不需要任何转接头即可适配商品化的各类中压液相纯化系统，如ÅKTA层析系统等；也可使用鲁尔接口注射器或蠕动泵，通过合适的1/16" Male/Luer Female转接头与脱盐柱进行连接。如果没有相应的转接头不推荐连接注射器或蠕动泵使用，因为容易出现脱盐柱内部压力过高而导致进样困难甚至漏液的情况。

BalbDesalt 6FF样品脱盐柱(>400kD,20mL，适配AKTA层析系统)采用的是Balbrose 6FF基质，该基质是高度交联的6%琼脂糖，与Sepharose 6 Fast Flow的性能基本一致。本制品用于分离样品时，体积较大的大分子不能进入基质网状筛孔而被阻隔在基质凝胶之外，随着流动溶液沿着基质凝胶颗粒间的缝隙移动，下移速度较快，先被洗脱出柱；体积较小的分子或离子可以进入基质网状筛孔从而进入凝胶内部，随着流动溶液在凝胶颗粒的网孔内移动，因此小分子量物质在基质内停留时间更长，下移速度较慢，后被洗脱出柱，这种分离纯化方式被称为尺寸排阻层析(SEC)，也常被叫做分子筛层析(MSC)或凝胶过滤层析(GFC)(图1)。

BalbDesalt 6FF样品脱盐柱(>400kD,20mL，适配AKTA层析系统)可根据实验需求通过串联2～5根脱盐柱增加上样体积。1根脱盐柱最大可以处理20mL样品，2根本脱盐柱串联最大可以处理40mL样品，以此类推，5根本脱盐柱串联最大可以处理500mL样品。

• 分离速度快、节省时间：脱盐柱可以5～20mL/min的高流速对样品进行快速分离，处理一个样品通常只需要5分钟，而半透膜透析至少需要6小时；
  
• 适合小体积操作、样品回收率高：脱盐柱可以有效处理2～20mL的小体积样品，回收率通常>95%，但是半透膜透析后释放样品时会有部分样品粘附在半透膜上，无法完全回收，因此不适合小体积样品；
  
• 节省溶液：半透膜透析时需要大量的缓冲液，但是脱盐柱仅需250mL缓冲液即可完成实验。

• 脱盐柱反复使用，可能会导致样品回收率降低。
  
• 请勿冷冻保存本制品，冻结会导致脱盐柱的基质碎裂。
  
• 保存和纯化过程中应始终保持基质湿润，避免气泡进入脱盐柱中。
  
• 由于脱盐后，样品会被稀释，所以拟脱盐的目标蛋白浓度尽量不要太低，以免脱盐后目标蛋白浓度太低不得不进行浓缩。
  
• 建议在缓冲液中加入25mM NaCl，以防止潜在的离子间相互作用。如不能使用NaCl，可以尝试加入100mM乙酸铵(NH4Ac)或100mM碳酸氢铵(NH4HCO3)挥发性缓冲液。
  
• 当缓冲液中盐浓度>1M时，疏水性物质在柱子内的停留时间可能会延长或与基质结合。
  
• 当缓冲液中含有>1.5M (NH4)2SO4时，脱盐柱基质可能会发生收缩。
  
• 在冷库、层析冷柜等低温条件下使用20%乙醇或其它粘稠的缓冲液时，注意保持脱盐柱的压力<0.5MPa，如果柱压过高可以通过降低流速降低柱压。

• 样品的准备：样品上样前须通过离心或0.45μm滤膜去除不溶物。
  
  • 在常规缓冲液中，高至70mg/mL的蛋白样品或5mg/mL的葡聚糖高分子聚合物，不会影响分离效果。
  • 在样品粘度不高的情况下，样品浓度不会影响分离效果，样品浓度越高则回收率越高，低浓度样品回收率可能会降低。
  • 平衡使用的缓冲液即为样品存储缓冲液。
• 脱盐柱的预平衡：
  
  • 将50mL鲁尔接口注射器或蠕动泵管道充满缓冲液。
    
  • 移除脱盐柱的上堵头，将合适的Male/Luer Female转接头安装到脱盐柱上。
    
  • 为防止气泡进入脱盐柱，需要保证鲁尔接口注射器或蠕动泵管道内的缓冲液在约1个液滴/秒的缓慢流速条件下，接入装有转接头的脱盐柱，然后立即移除脱盐柱的下堵头。
    
    • 上下堵头请保留。
  • 以5mL/min的流速，用5倍柱体积(CV)的缓冲液平衡脱盐柱以除去脱盐柱中的乙醇。
    
    • 应始终保持基质湿润，避免气泡进入脱盐柱中。
    • 在样品分离过程中，如有气泡意外进入脱盐柱并不影响分离效果，可以等分离实验完成后参照注1对脱盐柱进行除泡。
    • 如果使用1根BalbDesalt 6FF脱盐柱本制品，5倍柱体积为350mL；如果串联使用2根BalbDesalt 6FF脱盐柱本制品，5倍柱体积为700mL，可以此类推。
• 样品的上柱和洗脱：
  
  • 确定上样环已注满缓冲液后，将样品通过注射器注入上样环中。
    
    • 1根BalbDesalt 6FF脱盐柱本制品的最大上样体积为20mL，如需更大体积上样，可通过串联2-5根脱盐柱本制品增加上样体积。
  • 设置程序：样品注入量为20mL，流速为5～20mL/min，收集体积为5mL，报警压力为0.5MPa，洗脱体积为1CV，打开紫外检测器和电导检测器。
    
  • 运行BalbDesalt 6FF脱盐柱洗脱程序，观察紫外吸收峰并收集分离后的样品。
    
    • 如果使用1根BalbDesalt 6FF脱盐柱本制品，通常情况下大分子量物质在20～50mL处被洗脱下来；如果串联使用2根BalbDesalt 6FF脱盐柱本制品，通常情况下大分子量物质在40～100mL处被洗脱下来，可以此类推更多脱盐柱串联使用时大分子量物质的洗脱位置。
    • 如果使用1根BalbDesalt 6FF脱盐柱本制品，1CV洗脱体积为70mL；如果串联使用2根BalbDesalt 6FF脱盐柱本制品，1CV洗脱体积为140mL，可以此类推。
• 脱盐柱的清洗和保存：实验完成后，先用5倍柱体积或更多的H2O清洗脱盐柱，接着用5倍柱体积的20%乙醇清洗脱盐柱，安装并拧紧脱盐柱的上堵头和下堵头，将脱盐柱置于4℃或室温保存。

产品名称		BalbDesalt脱盐柱
类别		Multi Spin (96孔)	Spin	Mini	Midi	Max	Superfine	Fine
图示
基质		Balbdex G-25M Balbrose 6FF	G-25M 6FF	G-10 G-25M 6FF	G-10 G-25M 6FF	G-25M 6FF	G-25SF 6FF	G-25F 6FF
离心法①	样本量	70～130μL		0.2～0.5mL	0.75～1.5mL	1.75～2.5mL	不兼容
	洗脱体积	70～130μL		0.2～0.5mL	0.75～1.5mL	1.75～2.5mL
	稀释倍数	1
重力法	样本量	不兼容		0.1～0.3mL② 0.1～0.5mL③	0.4～1mL② 0.5～1.5mL③	1～2.5mL
	洗脱体积			1mL	2mL	3.5mL
	稀释倍数			2-10	1.3～3	1.5～3.5
Syringe	样本量	不兼容		不兼容			0.25～1.5mL	不兼容
	洗脱体积						1～2mL
	稀释倍数						1.3～4
AKTÅ系统	样本量	不兼容		不兼容			0.25～1.5mL	2～20mL
	洗脱体积						1～2mL	10～30mL
	稀释倍数						1.3～4	1.5～5
串联使用数量		不兼容					1～5个