样品脱盐柱(0.5mL)

产品货号：

YTC0501

中文名称：

样品脱盐柱(0.5mL)

英文名称：

BalbDesalt G-25 Mini Desalting Column

产品规格：

5个|20个

发货周期：

1～3天

产品价格：

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BalbDesalt G-25样品脱盐柱(0.5mL)是一种简单、快速、高效地使用Balbdex G-25 Medium (G-25M)基质分离大分子量物质与小分子量物质的预包装即用型层析柱，俗称脱盐柱，主要用于去除蛋白质、核酸、多肽、多糖等样品的盐离子、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。本脱盐柱使用的填料为Balbdex G-25 Medium，填料粒径为70～250μm，可分离分子量>5kDa的蛋白质或其它大分子样品，柱床体积为2.1mL，建议上样量为0.1～0.5mL，本制品的功能和使用方法与Cytiva的PD MiniTrap G-25一致，适用于重力法或离心法。

BalbDesalt G-25样品脱盐柱(0.5mL)采用的是Balbdex G-25 Medium基质，该基质是葡聚糖(Dextran)经环氧氯丙烷交联剂通过醚键交联形成的三维网状筛孔结构的高分子聚合物，与Sephadex G-25 Medium的性能基本一致。本制品用于分离样品时，体积较大的大分子不能进入基质网状筛孔而被阻隔在基质凝胶之外，随着流动溶液沿着基质凝胶颗粒间的缝隙移动，下移速度较快，先被洗脱出柱；体积较小的分子或离子可以进入基质网状筛孔从而进入凝胶内部，随着流动溶液在凝胶颗粒的网孔内移动，因此小分子量物质在基质内停留时间更长，下移速度较慢，后被洗脱出柱，这种分离纯化方式被称为尺寸排阻层析(SEC)，也常被叫做分子筛层析(MSC)或凝胶过滤层析(GFC)(图1)。

图1．BalbDesalt样品脱盐柱的工作原理图。

基本信息

基质	Balbdex G-25 Medium,cross-linked dextran
填料粒径	70～250μm
分离范围	Mw ＞ 5kDa
建议上样量	0.1～0.5mL
样品稀释倍数	2～10
柱床体积	2.1mL
柱床尺寸	0.9×6.3cm
柱床内径	8.9mm
化学稳定性	All commonly used buffers;Avoid oxidizing agents
pH稳定性	pH2～13
使用方法	Gravity or Spin
保存条件	20% ethanol at 4～30℃

本脱盐柱应用广泛，可以有效去除样品中的盐离子、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。可用于对蛋白质、核酸、多肽、多糖等样品进行脱盐，完成溶液置换；去除培养基中的酚红，便于后续通过离子交换层析纯化蛋白质或核酸；去除DNA样本中的单核苷酸，便于后续DNA测序；去除样本中的小分子量标记物；通过分离大分子量物质与小分子量物质终止两者之间的反应；移除蛋白酶的产物、辅助因子或抑制剂；去除核酸标记反应中多余的放射性标记物；去除体外生物素标记反应中多余的生物素(D-Biotin)。

本脱盐柱显著优于传统半透膜透析方法。

分离速度快、节省时间：脱盐柱可以对样品进行快速分离，处理一个样品通常只需要5分钟，而半透膜透析至少需要6小时；
适合小体积操作、样品回收率高：脱盐柱可以有效处理0.1～0.5mL的小体积样品，回收率通常>90%，但是半透膜透析后释放样品时会有部分样品粘附在半透膜上，无法完全回收，因此不适合小体积样品；
节省溶液：半透膜透析时需要大量的缓冲液，但是脱盐柱仅需10mL缓冲液即可完成实验。

本制品采用重力法分离0.5mL样品的效果图参见图2。

图2．BalbDesalt G-25样品脱盐柱(0.5mL)重力法分离大分子量物质与小分子量物质的效果图。平衡、洗脱溶液均为10mM Tris pH7.4,50mM NaCl，加入0.5mL样品(2mg/mL BSA in 10mM Tris pH7.4,500mM NaCl)，实线A280nm代表紫外吸收值监测大分子量物质(BSA)，箭头表示BSA在0.5～1.5mL处被洗脱下来；虚线代表电导读数监测小分子量物质(NaCl)。实验结果显示BalbDesalt G-25样品脱盐柱(0.5mL)可以有效分离大分子量物质与小分子量物质。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本脱盐柱有重力法和离心法两种使用方式，可根据实验需求进行选择(图3)。

重力法：样品利用重力流经脱盐柱，操作简单，设备要求低，样品回收率比离心法稍高，但样品会发生约1.4倍的稀释；
离心法：样品利用离心力流经脱盐柱，样品回收率比重力法稍低，但样品不会被稀释。

图3．BalbDesalt G-25样品脱盐柱(0.5mL)的重力法和离心法两种使用方法示意图。重力法中的脱盐柱上端可通过针筒型层析柱接头(Syringe Connector)与10mL注射器空柱管连接用于柱平衡(图B)，或下端可通过双母鲁尔接头(Female Luer Connector)与鲁尔接口注射器(Luer Syringe)组装后用于柱平衡(图C)，或在下端连接30mL鲁尔接口注射器，上端连接30mL注射器空柱管用于柱平衡(图D)。离心法中脱盐柱可直接放入15mL收集管组装后使用(图E)。注射器法中脱盐柱上端需要针筒型层析柱接头(Syringe Connector)与10mL注射器空柱管连接，下端需要双母鲁尔接头(Female Luer Connector)与鲁尔接口注射器(Luer Syringe)组装后使用(图C)。

产品组成

组分	5个	20个
样品脱盐柱(0.5mL)	5个	20个
说明书	1份	1份

保存：2～8℃，有效期2年。

注意事项

为防止交叉污染，本制品建议一次性使用。
脱盐柱反复使用，可能会导致样品回收率降低。
请勿冷冻保存本制品，冻结会导致脱盐柱的基质碎裂。
保存和纯化过程中应始终保持基质湿润，避免气泡进入脱盐柱中。
建议在缓冲液中加入25mM NaCl，以防止潜在的离子间相互作用。如不能使用NaCl，可以尝试加入100mM乙酸铵(NH4Ac)或100mM碳酸氢铵(NH4HCO3)挥发性缓冲液。
当缓冲液中盐浓度>1M时，疏水性物质在柱子内的停留时间可能会延长或与基质结合。
当缓冲液中含有>1.5M (NH4)2SO4时，脱盐柱基质可能会发生收缩。

样品的准备：
样品上样前需通过离心或0.45μm滤膜去除不溶物。
- 在常规缓冲液中，高至70mg/mL的蛋白样品或5mg/mL的葡聚糖高分子聚合物，不会影响分离效果。
- 在样品粘度不高的情况下，样品浓度不会影响分离效果，样品浓度越高则回收率越高，低浓度样品回收率可能会降低。
- 样品回收率与样品种类直接相关，通常情况下70%～90%的样品回收率属于正常现象。
- 平衡使用的缓冲液即为样品存储缓冲液。
重力法：
- 脱盐柱的准备：首先移除脱盐柱的下堵头，然后将脱盐柱的下端浸没到缓冲液中，再移除脱盐柱的上堵头，然后可从上口倾斜倒出脱盐柱内的保存溶液。
  - 如果不先移除脱盐柱的下堵头，脱盐柱的上堵头会因为负压而难以取出。
  - 如果移除脱盐柱的上堵头时，脱盐柱的下端没有浸没到缓冲液中，负压气泡可能会进入脱盐柱中。
- 使用重力柱支架(3mL，16孔)或铁架台固定脱盐柱，并将其置于烧杯或试管上方。
- 脱盐柱的预平衡：重力平衡法或注射器平衡法，选择一种方法即可。
  - 重力平衡法：向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管，每次约2mL，待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后，再次倒入缓冲液充满柱管，重复此步骤3～4次。
    - 可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector)将10mL注射器空柱管连接到脱盐柱上方(图3B)，增加溶液储量，一次性倒入8mL缓冲液以平衡脱盐柱。
  - 注射器平衡法：脱盐柱下端通过双母鲁尔接头(Female Luer Connector)与鲁尔接口注射器(无针，30mL)连接(图3C)。向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管，每次约2mL，然后拉动鲁尔接口注射器推杆使缓冲液流穿脱盐柱，待缓冲液几乎全部进入脱盐柱时，再次倒入缓冲液充满柱管，然后拉动鲁尔接口注射器推杆使缓冲液流穿脱盐柱，重复此步骤3～4次。
    - 可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector)将10mL注射器空柱管连接到脱盐柱上方(图3D)，增加溶液储量，一次性倒入8mL缓冲液以平衡脱盐柱。
    - 拉动鲁尔接口注射器推杆的速度控制在0.5～1mL/分钟为宜。
    - 拉动鲁尔接口注射器推杆过程中应始终保持基质湿润，避免空气进入脱盐柱中。
- 上样：待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后，移液器吸头贴近脱盐柱上筛板中央加入0.5mL样品，如果上样体积不足0.5mL，待样品全部进入脱盐柱后，需要贴近脱盐柱上筛板中央补入“(0.5 - X) ml”的缓冲液，此时的流穿液无需收集。
  - X为上样体积，如果上样体积X为0.3mL，那么需要补入“0.5–0.3 = 0.2mL”的缓冲液。
  - 样品注入方式会直接影响样品回收率。上样时需要将移液器吸头伸入脱盐柱空管中，在上筛板的中央加入样品。
- 洗脱：待柱管中的样品或补齐的缓冲液全部进入脱盐柱后，将1.5mL收集管置于脱盐柱下方，向脱盐柱中加入约2mL缓冲液，此时的流穿液需要收集，每管收集0.25mL。
离心法：
- 脱盐柱的准备：首先移除脱盐柱的下堵头，然后将脱盐柱的下端浸没到缓冲液中，再移除脱盐柱的上堵头，然后可从上口倾斜倒出脱盐柱内的保存溶液。
  - 如果不先移除脱盐柱的下堵头，脱盐柱的上堵头会因为负压而难以取出。
  - 如果移除脱盐柱的上堵头时，脱盐柱的下端没有浸没到缓冲液中，负压气泡可能会进入脱盐柱中。
- 使用重力柱支架(3mL，16孔)或铁架台固定脱盐柱，并将其置于烧杯或试管上方。
- 脱盐柱的预平衡：向脱盐柱中加入缓冲液充满柱管，每次约2mL，待柱管中的缓冲液全部进入脱盐柱后，再次倒入缓冲液充满柱管，重复此步骤2～3次。
  - 可使用针筒型层析柱接头(Syringe Connector)将10mL注射器空柱管连接到脱盐柱上方(参考图B/D)，增加溶液储量，一次性倒入8mL缓冲液以平衡脱盐柱。
- 用镊子取出上垫片，再次倒入缓冲液充满柱管，将脱盐柱放入15mL收集管中，无需盖盖子，1000×g离心2分钟，倒出离心管内的液体。
  - 使用非水平转头的情况下，由于离心会使树脂压实形成一个向上的斜面，该斜面的方向宜在后续步骤中保持，所以在脱盐柱外壳上的斜面向上位置做标记，在随后的离心步骤中需要调整好离心管的放入方向，确保离心后斜面的方向和位置不会改变。
- 上样：移液器吸头贴近树脂的中心位置缓慢加入0.2～0.5mL样品，使脱盐柱中的树脂吸入样品。
  - 样品体积不能超过脱盐柱规定的样品量体积，否则会降低样品回收率。
  - 样品注入方式会直接影响样品回收率，需要将移液器吸头伸入脱盐柱空管中，在贴近树脂的中心位置加入样品。
- 洗脱：将脱盐柱放入新的15mL收集管中，无需盖盖子，1000×g离心2分钟，此时的流穿液需要收集。
检测：
可通过的A280nm紫外吸收值(如NanoDrop)、蛋白浓度测定试剂盒(Bradford法)、SDS-PAGE凝胶电泳配合考马斯亮蓝超快染色液等方法检测样品所在的收集管。
BalbDesalt G-25 Mini脱盐柱的清洗和保存
为防止交叉污染，本脱盐柱建议一次性使用。如需重复使用脱盐柱，实验完成后，先用25mL或更多H2O，接着用25mL 20%乙醇清洗脱盐柱，安装并拧紧脱盐柱的上堵头和下堵头，将脱盐柱置于4℃或室温保存。

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