产品目录

本制品是一种通常仅需30分钟就可以从完成转印的印迹膜到获得目的蛋白条带的超快速Western检测试剂盒。本试剂盒包含了FastWB封闭液、FastWB抗体稀释液、FastWB HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)、FastWB Western洗涤液、FastWB BalbECL A液和B液。本试剂盒使用便捷，能够显著缩短封闭、一抗和二抗孵育等的时间，试剂盒中包含从封闭到化学发光所需的所有溶液，用户仅需自备一抗，转膜完成后通常30分钟内就可以得到高质量的目的蛋白Western结果，可以极大加快目的蛋白的检测速度。

本试剂盒特别适用于有使用相应一抗进行Western检测经验的情况，此时使用原有的一抗配合本试剂盒通常就能在30分钟内实现从完成转印的印迹膜到获得预期的目的蛋白条带。经实测，大多数情况下使用本试剂盒的效果优于原常规检测方法。

本试剂盒提供从封闭到化学发光所需的HRP标记二抗、缓冲液、洗涤液和检测试剂，用户仅需自备在常规Western中使用的一抗，即可在30分钟内获得与常规Western检测相似或更优的目的条带。本系列产品还提供了不包含二抗的超快速Western试剂盒和包含二抗的超快速Western试剂盒(兔源一抗适用)。

• 本试剂盒中的FastWB封闭液封闭时间仅需5分钟，总体效果显著优于传统的基于BSA (牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液。
  
• 本试剂盒中的FastWB抗体稀释液针对Western进行了深度优化，可同时用于一抗和二抗的稀释，用其配制的一抗工作液孵育时间仅需15分钟，二抗工作液孵育时间仅需5分钟。本制品稀释和配制的抗体工作液，可以在4℃保存和使用不少于1个月，并且可以重复使用。
  
• 本试剂盒中的FastWB Western洗涤液用于Western时一抗或二抗孵育后的洗涤，每次洗涤时间仅需30秒即可达到理想效果，降低背景，增强信噪比。
  
• 本试剂盒中的FastWB BalbECL化学发光试剂，灵敏度极高、背景低、发光时间长，成像效果极优。

如果检测的是6.6×8.5cm印迹膜，按照每次封闭需要FastWB封闭液5mL、稀释一抗和二抗的FastWB抗体稀释液各5mL，稀释后的一、二抗重复使用3次，洗涤液每次使用10mL，FastWB BalbECL工作液每次需要1mL计算，两种本规格的试剂盒分别可以进行6次和30次的Western快速检测。如果检测的是更常见的裁切后的约2×8.5cm印迹膜，按照封闭以及一、二抗孵育液体用量为每次2mL，洗涤液用量每次4mL，发光试剂工作液用量每次0.4mL计算，两种本规格的试剂盒分别可以检测15次和75次。

• 本试剂盒也可置于4℃保存，至少3个月有效。FastWB BalbECL A液和B液须避光保存。
  
• 请注意回收使用过的一抗工作液和二抗工作液。回收的一、二抗工作液可以再重复使用2次。稀释后的一、二抗工作液，包括使用过的一、二抗工作液，请4℃保存。
  
• 回收后重复使用的一、二抗工作液，使用方法同新鲜稀释的一、二抗工作液。如果在重复使用过程中发现一、二抗工作液出现轻微混浊现象，可以10000×g离心1～3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的一、二抗工作液出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
  
• 使用本制品，通常30分钟可得到高质量的目的蛋白Western结果，即封闭5分钟、一抗孵育15分钟、洗涤30秒3次、二抗孵育5分钟、洗涤30秒3次、FastWB BalbECL试剂孵育30秒、成像通常0.5分钟之内。
  
• 个别情况，如果希望获得到更好的Western结果，可适当增加封闭、一抗、二抗孵育及洗涤的时间，并适当优化成像的曝光时间。
  
• FastWB BalbECL A液和B液对人体有刺激性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

• 膜的封闭：
  
  • 完成转膜后，立即把印迹膜(约6.6×8.5cm)放置到预先加入5mL FastWB封闭液的Western洗膜盒中，置于翘板摇床上缓慢摇动，室温封闭5分钟。后续如果无特殊说明，各种试剂的用量都以约6.6×8.5cm大小的印迹膜为例进行说明。
    
    • 经反复测试，室温封闭5分钟即可达到理想的封闭效果，但也可以根据实际情况酌情延长封闭时间。
    • 如果使用裁切后约2×8.5cm印迹膜，推荐使用2mL FastWB封闭液，后续使用的各种试剂的体积也须相应按比例缩小。
• 一抗孵育：
  
  • 一抗工作液的配制。根据一抗推荐稀释比例或优化后进行常规Western检测使用的稀释比例进行一抗工作液的配制。例如一抗推荐稀释比例为1:1000时，则在5mL FastWB抗体稀释液中加入5μL一抗并混匀，即可得到5mL一抗工作液；如果推荐稀释比例为1:500，则在5mL FastWB抗体稀释液中加入10μL一抗并混匀。
    
  • 用微型台式真空泵、移液器或滴管等吸尽用于封闭的FastWB封闭液。
    
  • 加入5mL一抗工作液。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜，推荐用量为2mL。
    
  • 置于翘板摇床上缓慢摇动，室温孵育15分钟。
    
    • 经反复测试，室温孵育15分钟即可达到理想检测效果，但也可以根据实际情况酌情延长一抗孵育时间。
    • 一抗孵育时，请参考步骤3a进行二抗工作液的配制。
  • 回收一抗工作液，留待后续重复使用。并吸净残留的一抗工作液。
    
  • 使用FastWB Western洗涤液洗涤3次，每次的用量为10mL，每次30秒。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜，每次的推荐用量为4mL。每次推荐使用真空泵吸净残留的洗涤液。
    
    • 经反复测试，洗涤3次，每次30秒，即可达到理想效果，但也可以根据实际情况每次酌情延长洗涤时间或增加洗涤次数。
• 二抗孵育：
  
  • 二抗工作液的配制。在5mL FastWB抗体稀释液中加入10μL FastWB HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)并混匀，即可得到5mL二抗工作液。
    
  • 加入5mL二抗工作液。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜，推荐用量为2mL。
    
  • 置于翘板摇床上缓慢摇动，室温孵育5分钟。
    
    • 经反复测试，室温孵育5分钟即可达到理想检测效果，但也可以根据实际情况酌情延长抗体孵育时间。
  • 回收二抗工作液，留待后续重复使用。并吸净残留的二抗工作液。
    
  • 使用FastWB Western洗涤液洗涤3次，每次的用量为10mL，每次30秒。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜，每次的推荐用量为4mL。每次推荐使用真空泵吸净残留的洗涤液。
• 蛋白检测：
  
  • FastWB BalbECL工作液的配制。混合0.5mL FastWB BalbECL A液和0.5mL FastWB BalbECL B液，配制成1mL FastWB BalbECL工作液，室温放置备用。工作液宜在临检测前配制。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜，FastWB BalbECL工作液配制0.4mL即可。
    
  • 用WB专用镊子将膜取出，用吸水纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白面)，然后置于一洁净保鲜膜上。
    
  • 滴加1mL FastWB BalbECL工作液到膜上，确保使工作液均匀覆盖在膜上，放置30秒。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜，FastWB BalbECL工作液的推荐用量为0.4mL。
    
    • 通常放置30秒就可以进行后续的成像或压片检测，但也可以根据实际情况酌情延长放置时间。
  • 取膜，弃FastWB BalbECL工作液，用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间，随后进行化学发光成像仪检测或压片检测。
    
    • 详细的Western实验步骤可以参考百奥莱博的相关网页：Western实验步骤及试剂。