本制品是一种简单、快速、高效的通过和样品溶液按照一定比例混合并孵育,离心弃上清后就可以充分去除抗体溶液中作为稳定剂添加的牛血清白蛋白(BSA)的试剂。使用本制品去除BSA后的抗体可转换至更合适的缓冲液中,也可根据需要调整抗体的浓度。本制品可用于任何种类或亚型抗体中BSA的快速去除。本制品可以去除的BSA的浓度可以达到0.5%。如果BSA的浓度偏高,可以考虑适当稀释样品或进行BSA的两次去除。
本制品去除BSA的速度快。本制品使用快速,通常约15分钟即可完成BSA的去除,相对于通过蛋白A或蛋白G纯化抗体的方法节约更多时间,且缩短操作时间可以有效避免在长时间操作过程中抗体的降解或变性,充分保证抗体的活性。
本制品使用便捷。常见的BSA去除方法相对比较复杂,而本制品只需将含BSA的抗体溶液与BSA快速去除试剂按照5:4 (v/v)的比例混合,室温孵育10分钟后离心5分钟,弃上清后用合适的缓冲液重悬抗体沉淀即可。

BSA通常被添加到纯化的抗体溶液中作为长期储存的稳定剂,并且一般不会干扰免疫检测。但当进行抗体生物素化、荧光染料标记、酶标记、胶体金标记等实验时,BSA会与抗体形成竞争关系,大大降低抗体的偶联效率。此外,在进行抗体片段化、共价固定等其它实验时,BSA的存在也是一种阻碍。因此,在进行这些实验前,必须去除抗体中的BSA。

组分 | 1mL | 5mL | 20mL |
抗体BSA清除剂 | 1mL | 5mL | 20mL |
说明书 | 1份 |
保存:室温,有效期1年。

本制品适用范围广。本制品可用于对保存在如PBS、Tris、MES等各种常见缓冲液中的抗体去除BSA。在pH6.0到8.0的缓冲范围内,本制品均有效。抗体等溶液中常见的添加剂如糖类、螯合剂(如EDTA)、甘油(低于20%)和防腐剂等物质对本制品的使用通常无影响。对于样品中含有高浓度甘油等不兼容试剂的情况,可以适当稀释后再使用本制品进行处理。

本制品去除BSA效果好。常见的BSA去除技术通常去除BSA不彻底,会有很多BSA残留。本制品去除BSA效果好,可去除抗体溶液中和抗体等量的几乎全部的BSA。本制品用于去除抗体中的BSA效果参考图1。

图1.本制品用于去除抗体中BSA去除的效果图。含有1mg/mL的IgG和1mg/mL的BSA的混合液,使用本制品后,通过SDS-PAGE凝胶显示BSA去除前后的效果。电泳后,然后使用考马斯亮蓝超快染色液对蛋白凝胶进行染色。泳道1和2分别为IgG和BSA对照;泳道3为进行去除前的混合液;泳道4和5分别为使用本制品对混合液进行去除后分离出的BSA以及IgG。由图可知,使用本制品几乎可完全分离抗体和BSA。M:彩色预染蛋白Maker(6.5~270kD)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

- 本制品不能用于去除抗体溶液中添加的明胶,也不能用于对同时含有明胶和BSA的抗体溶液中进行BSA的去除。
- 本制品不能用于从细胞培养液中去除BSA。
- 待处理的溶液里需至少含有30μg的抗体,此为肉眼能观察到的清晰可见的抗体沉淀的下限。
- 本制品可以从抗体浓度为0.03~10mg/mL的抗体溶液中去除BSA,抗体浓度越高去除效果越好。
- 当BSA浓度小于0.5% (5mg/mL)时,BSA可以被有效去除。如果BSA浓度较高,用去离子水或蒸馏水稀释抗体溶液,直到BSA浓度低于0.5%,或者重复去除一次以完全去除BSA。
- 抗体溶液中如果添加了甘油,当甘油含量为20%或更低时,对本制品没有不利影响。如果甘油含量高于此值,应使用去离子水或蒸馏水稀释抗体溶液,直到甘油含量为20%或更少。
- 低温时本制品会出现沉淀或结晶,可以在不超过50℃的水浴(优先推荐使用42℃水浴)中加热溶解并混匀后使用。
- 抗体溶液中加入本制品后,应使用移液器吹打,使试剂与抗体溶液充分混合。

- 抗体混合液与BSA快速去除试剂混合:取出抗体溶液和BSA快速去除试剂,抗体溶液与BSA快速去除试剂按照5:4的体积比进行混合,并充分混匀。如每100μL抗体溶液中加入80μL BSA快速去除试剂并充分混匀。
- 使用前一定要充分重悬本制品,即充分颠倒若干次使混合均匀。如果本制品析出沉淀,可以42℃水浴加热10分钟或更长时间,期间可以摇晃加速沉淀溶解,待完全溶解并混匀后使用。
- 实验前须检测抗体混合液中抗体和BSA的浓度,以确保在本制品的适用范围内。抗体浓度应为0.03~10mg/mL,抗体浓度越高去除效果越好;BSA浓度应小于0.5% (5mg/mL),若BSA浓度较高,可用去离子水或蒸馏水进行稀释,或者重复一次以完全去除BSA。
- 室温摇动孵育10分钟:在混匀仪或侧摆摇床上低转速室温孵育10分钟。
- 离心:将孵育后的样品13000×g室温离心5分钟,此时离心管底部通常可见白色沉淀。
- 离心时间可以根据抗体缓冲液的组份等的不同进行调整。
- 请仔细核对离心力,离心力不能超过13000×g。
- 去除上清:小心吸除上清至洁净的离心管中,切勿触及沉淀,也不可剧烈晃动离心管。可暂时保存上清,待确定去除效果后再丢弃。
- 重悬沉淀:根据后续实验要求在含有沉淀的离心管里加如适当体积的合适的缓冲液,使用移液器小心吹打20~30次,重悬抗体沉淀,吹打时避免产生气泡。
- 如果看不到明显的白色沉淀,可以在沉淀可能形成的区域用移液器小心吹打。
- SDS-PAGE检测(选做):通过SDS-PAGE电泳实验检测BSA去除的效果,注意设置未去除时的对照。
- 抗体保存:如果短时间内使用,建议将抗体溶液保存在4℃;如果暂不使用,建议将抗体溶液保存在-20℃或-80℃。
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