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本制品是一种新型、高效的对感兴趣的蛋白、抗体或其它含有伯氨基的分子进行HRP快速标记的试剂盒。经本试剂盒标记的抗体可直接用于Western (WB)、ELISA、IHC等，无需进一步纯化。

本试剂盒进行HRP与抗体等生物分子共价偶联的基本原理请参考图1。GA-HRP是已由戊二醛激活的HRP，其中GA是一种广泛用作固定剂和交联剂的有机化合物，在pH6.5～9.5时，GA的醛基与蛋白质分子中的赖氨酸残基的伯胺基反应，形成稳定的共价键。

• 本试剂盒标记效率高、标记速度快、操作简单。本试剂盒提供的GA-HRP可高效标记各种带伯胺基的蛋白、抗体或其它分子，经标记的抗体可直接用于WB、ELISA、IHC等，无需进一步纯化。
  
• 本试剂盒标记时间短、体系灵活。本试剂盒可以在3小时内完成整个标记反应，能有效保证生物大分子的活性，实际操作时间不超过5分钟。

• 本试剂盒收到后请立即使用或按照说明书推荐的条件保存。随着保存时间的延长，GA-HRP的酶活力和标记能力可能会有一定程度的下降。
  
• 待标记分子的溶液里不能含有除待标记分子上的额外的伯胺基团或胺基离子。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 准备工作：
  
  • 1M NaHCO3的配制。根据样品量配制适量的1M NaHCO3溶液，如称取20mg NaHCO3，加入238μL超纯水即得1M NaHCO3溶液。NaHCO3可维持标记反应体系的pH在7～9之间，提高标记效率，根据步骤1b中的要求，直接使用或稀释10倍至0.1M NaHCO3溶液进行使用。
    
    • NaHCO3溶液须现用现配。
  • 抗体等生物分子的准备。后续以抗体为例进行说明，其余生物分子可以适当参考执行。抗体浓度推荐为1mg/mL，最高不要超过4mg/mL。如果抗体浓度低于1mg/mL，标记效率可能会降低。抗体溶液的准备方式如下：
    ① 在PBS中冻干的抗体：使用0.1M NaHCO3溶液复溶至所需浓度和体积。
    ② PBS溶液中的抗体：向PBS溶解的抗体中添加原溶液1/10体积的1M NaHCO3溶液，使其中NaHCO3终浓度为0.1M。
    ③ 其它缓冲液中的抗体：含有铵离子或伯胺(例如Tris或甘氨酸)的缓冲液会干扰预期的反应。推荐使用百奥莱博的样品脱盐柱将这些缓冲液替换为0.1M NaHCO3溶液，或通过超滤去除铵离子等。
    
    • 应避免使用含有BSA或明胶作为稳定剂的抗体，否则标记效率会受到明显影响，因为本试剂盒也可以标记BSA的。如需去除BSA，推荐使用抗体BSA清除剂。
  • GA-HRP的准备。将GA-HRP取出，平衡至室温(约25℃)。开启瓶盖之前，先适当离心，将粉末聚集于管底，避免开盖时损失。
• 小量样品(每管不超过0.1mL，蛋白浓度不超过4mg/mL)的HRP标记反应：
  
  • 向每管0.1mg GA-HRP粉末中加入100μL步骤1b中的待标记抗体等生物分子溶液(1～4mg/mL)，涡旋混匀。
    
  • 室温(约25℃)避光反应2小时或4℃避光反应过夜，反应过程推荐在翘板摇床(也称侧摆摇床)上进行。也可以使用旋转混匀仪，推荐的速度为25rpm上下翻转。
    
  • 反应的终止：称取4mg终止剂，直接溶解于步骤2b的反应体系中，混匀，室温(约25℃)避光反应1小时后，偶联抗体即可直接使用，无需纯化。
• 中量样品(每管不超过0.5mL，蛋白浓度不超过4mg/mL)的HRP标记反应：
  
  • 向每管0.5mg GA-HRP粉末中加入500μL步骤1b中的待标记抗体等生物分子溶液(1～4mg/mL)，涡旋混匀。
    
  • 室温(约25℃)避光反应2小时或4℃避光反应过夜，反应过程推荐在翘板摇床(也称侧摆摇床)上进行。也可以使用旋转混匀仪，推荐的速度为25rpm上下翻转。
    
  • 反应的终止：称取20mg终止剂，直接溶解于步骤3b的反应体系中，混匀，室温(约25℃)避光反应1小时后，偶联抗体即可直接使用，无需纯化。
• 大量样品(每管不超过2mL，蛋白浓度不超过4mg/mL)的HRP标记反应：
  
  • 向每管2mg GA-HRP粉末中加入2mL步骤1b中的待标记抗体等生物分子溶液(1～4mg/mL)，涡旋混匀。
    
  • 室温(约25℃)避光反应2小时或4℃避光反应过夜，反应过程推荐在翘板摇床(也称侧摆摇床)上进行。也可以使用旋转混匀仪，推荐的速度为25rpm上下翻转。
    
  • 反应的终止：称取40mg终止剂，直接溶解于步骤4b的反应体系中，混匀，室温(约25℃)避光反应1小时后，偶联抗体即可直接使用，无需纯化。