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本制品是一种经过改良的更加安全健康的无气味的使用蓝色和红色染料的蛋白上样缓冲液。本制品更加安全健康。本制品使用了无异味、水溶性更稳定、还原能力相近的还原剂替代了有气味的二硫苏糖醇(DTT)或巯基乙醇(2-Mercaptoethanol)，从而可以确保本SDS-PAGE蛋白上样缓冲液在正常使用或加热时都不会有异味，使蛋白上样操作更加安全健康。

除了没有气味外和染料不同外，本制品和常规的蛋白上样缓冲液的使用效果一致。本制品可以用于常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。除了没有异味和染料不同外，本制品与常规SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的使用效果一致，未观察到有任何显著差异。

本制品用于常规的SDS-PAGE电泳时，本制品中蓝色染料的迁移率与溴酚蓝一致，红色染料的迁移速度和蓝色染料相近。Tris-Gly电泳体系中，在SDS-PAGE的胶浓度低于15%时，红色染料的迁移速度微快于蓝色染料，胶浓度高于15%时，红色染料的迁移速度微慢于蓝色染料。

• 本制品用于蛋白变性时，建议95℃水浴或PCR仪加热5分钟，温度过高(如100℃)或时间过长(如超过15分钟)，有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
  
• 本制品不含剧毒的巯基乙醇和有刺激性气味的DTT，但还原效果一致，对于蛋白样品的处理效果和电泳效果一致。
  
• 本制品必须完全溶解后再使用。

• 在室温或不超过37℃的水浴中溶解1×SDS-PAGE蛋白上样液(双染料，无异味)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。使用完毕后置于-20℃保存。
  
• 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250μL 1×SDS-PAGE蛋白上样液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使上样缓冲液和细胞充分接触。通常1×SDS-PAGE蛋白上样液(双染料，无异味)接触细胞1～2秒后，细胞就会被裂解。裂解后的样品收集到一洁净离心管内。
  
• 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μL 1×SDS-PAGE蛋白上样液(双染料，无异味)的比例加入上样缓冲液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/管，然后再进行裂解。
  
• 对于组织样品：
  
  • 把组织剪切成细小的碎片。
    
  • 按照每20mg组织加入150～250μL 1×SDS-PAGE蛋白上样液(双染料，无异味)的比例加入上样缓冲液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的上样缓冲液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少上样缓冲液的用量。)
    
  • 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
    
  • 充分裂解后，将样品收集到一洁净离心管内。
    
    • 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
• 95℃水浴加热5～10分钟，以充分变性蛋白。
  
  • 加热前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体，通常在本上样缓冲液内95度水浴加热8～10分钟后可以使该粘稠的半透明状物体消失，以便于后续的上样操作。
    
  • 请务必95℃加热，温度过高(如100℃)或时间过长(如超过15分钟)，有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
    
  • 如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组DNA含量较高，加热5～10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再加热5～10分钟或者加入适量1×的蛋白上样缓冲液后再加热3～5分钟。充分加热后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放，同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失，这样就不会影响后续的上样操作了。适当超声或使用1mL注射器反复抽吸也可以打断基因组DNA从而使粘稠感消失。
• 冷却到室温后，室温稍离心一下以沉淀可能出现的杂质等，上清即可直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。通常电泳至红色或蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。