产品货号:
YT612
中文名称:
RIPA裂解液套装
英文名称:
RIPA Lysis Buffer Set
产品规格:
3×50mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
RIPA裂解液(强、中、弱套装)含有RIPA裂解液(强)、RIPA裂解液(中)和RIPA裂解液(弱)各50mL,便于实验时探索不同的实验条件。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036/YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
组分 | 规格 |
RIPA裂解液(强) | 50mL |
RIPA裂解液(中) | 50mL |
RIPA裂解液(弱) | 50mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期1年。
- 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
- 需自备PMSF,也可以向我司订购PMSF(YT615)。
- 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
- 对于培养细胞样品:
- 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
- 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2秒后,细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/管,然后再裂解。 - 充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μL或250μL。每100万细胞用100μL RIPA裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2~4mg/mL,不同细胞有所不同。
- 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
- 对于组织样品:
- 把组织剪切成细小的碎片。
- 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
- 按照每20mg组织加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
- 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
- 充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200μL RIPA裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15~25mg/mL,不同状态的不同组织有所不同。
- 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
- 把组织剪切成细小的碎片。
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